SN-38联合洛铂对胃癌细胞增殖抑制及其机制的初步研究

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目的:体外应用SN-38联合洛铂作用于人胃癌SGC-7901细胞,观察其对细胞增殖的影响,是否有协同作用。进一步观察两药对SGC-7901细胞内Bcl-2蛋白表达水平的影响。为临床上对于胃癌的治疗提供一定的理论依据。方法:1.细胞培养体外培养人胃癌SGC-7901细胞。细胞置于37℃、5%CO2的培养箱,用含10%胎牛血清以及青、链霉素各100U·mL-1的RPMI1640培养液培养。0.25%胰蛋白酶消化传代,取对数生长期细胞用于实验。2.(1)细胞形态学观察倒置显微镜下分别观察不同浓度的SN-38和洛铂作用于SGC-7901后,动态观察生长状况并进行拍照。(2)四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测两种药物单独和联合作用下不同药物浓度及不同时间对细胞增殖抑制情况,计算联合指数(Combination index,CI)用以分析联合用药时的相互作用。(3)用膜联蛋白-V(Annexin-V)和碘化丙啶(PI)双染色及流式细胞仪检测两种药物单独作用和联合作用细胞凋亡率。(4)采用蛋白印迹法(Western blot)分别检测SN-38、洛铂及联合用药对SGC-7901细胞内Bcl-2蛋白表达水平的影响。3.统计学分析:所有数据资料以均数±标准差(x±s)表示。采用SPSS17.0统计软件统计处理。总体采用方差分析,组间两两比较采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.细胞形态学观察:显微镜下观察发现低浓度SN-38(0.3125μg/ml)作用48h后可见极少量SGC-7901细胞变圆、脱落,大部分细胞仍贴壁生长。随着药物浓度增高,脱落细胞和细胞碎片逐渐增多,最高浓度的SN-38(40μg/ml)作用48h后可见绝大多数细胞脱落死亡。同样,低浓度洛铂(0.3125μg/ml)作用效果不明显。随着时间延长和浓度增加,脱落细胞逐渐增多,在高浓度洛铂(40μg/ml)作用48h后细胞已全部脱落,呈小颗粒样漂浮,死亡。2. MTT实验结果:SN-38、洛铂单药或联合应用对SGC-7901细胞的生长抑制作用会随着剂量的增加以及作用时间的延长增强,差异有统计学意义(P<0.05)。通过计算得到48h、72h作用时间下SN-38+洛铂的联合指数<0.8,提示两药联合应用对细胞的生长抑制有协同作用。3.流式细胞仪检测结果:流式细胞仪检测显示SN-38(20μg/ml)、洛铂(5μg/ml)作用48h后细胞凋亡率分别为46.7%±3.0%、54.5%±2.3%,显著高于对照组的25.6%±1.4%(P<0.01),联合用药组(20μg/mlSN-38+5μg/ml洛铂)的细胞凋亡率为82.3%±1.7%,显著高于单一用药组(P<0.01)。4. Western blot法的结果:经SN-38和洛铂分别处理过的SGC-7901细胞中Bcl-2表达水平较对照组明显降低,其Bcl-2蛋白表达总量随着两药浓度的增加而减少,且不同浓度灰度值比较差异均有统计学意义(P<0.05)结论:1.SN-38、洛铂单药对人胃癌SGC-7901细胞的生长有抑制作用,且成剂量-时间效应关系,联合应用使抑制效果明显增强,有协同作用。2.SN-38、洛铂单药可诱导人胃癌SGC-7901细胞早期凋亡,两药联合应用凋亡率明显增高。3.推测两种药物均可通过抑制人胃癌SGC-7901细胞内Bcl-2的蛋白表达来实现对细胞体外生长的抑制。
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