论文部分内容阅读
背景:急性冠脉综合征（Acute Coronary Syndrome,ACS）有不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris,UA）及急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）两种类型,高发病率与死亡率是其特点。外泌体是一种直径为40-100nm的膜囊泡,外泌体内有多种核酸,包括信使核糖核酸（Messenger Ribonucleic Aci,mRNA）、微小核糖核酸（micro-ribonucleic acids,miRNA）和其他非编码RNA等。目前外泌体miRNA作为癌症、糖尿病等疾病的诊断靶标的研究均有报道。然而,虽有研究发现外泌体miR-1及miR-133a在AMI及UA患者中表达水平增加,但外泌体miRNA作为ACS诊断生物标记物研究目前尚未报道。研究发现,血清外泌体的miRNA-21,miRNA-122和miRNA-126与冠脉内皮损伤相关,而ACS的发病也与血管内皮损伤等病理过程相关,由此猜测,外泌体中miR-21,miR-122和miR-126有可能作为AMI及UA诊断的生物标记物。而且,由于脂质双层的包装可以防止外泌体被体液酶降解,高度稳定,使外泌体在生物流体中有相对较长和稳定的表达时间。因此,血清外泌体miR-21,miR-122,miR-126可能作为诊断UA及AMI更稳定的生物标记物。经过前期试验,我们发现与正常健康人相比,ACS患者的血清外泌体miR-21,miR-122和miR-126 的表达水平增高。Gensini评分主要是通过冠状动脉造影获得患者血流状况,在此基础之上实现对冠状动脉狭窄程度的量化判断。有发现利用血清miRNA水平和Gensini评分可以相对快速的估算出冠脉狭窄程度。然而,生物活性更稳定的血清外泌体miRNA与Gensini评分的相关性未见公开报道。在本试验中,我们探讨了血清外泌体miR-21,miR-122和miR-126作为ACS诊断的生物标记物的可行性及其表达水平与Gensini评分的相关性,目的是寻找到一种稳定的对ACS患者作出诊断及基于Gensini评分对冠脉狭窄严重程度作出病情评估的生物标志物。方法:本试验将研究对象划分成三组,其中AMI组31例、UA组34例,正常健康人（对照组）22例。所有AMI组及UA组的个体在采血后须完成冠状动脉造影术。对每位符合纳入和排除标准的ACS患者的冠脉狭窄情况进行评估并计算出Gensini评分。UA组和对照组清晨空腹采血,纳入AMI的受试人群为在院患者出现胸痛并怀疑AMI后即刻采血。从血液中分离血清,并用超速离心法从血清中分离出外泌体,用电镜和生物标志物蛋白（CD9,CD63,CD81）对分离出的外泌体进行鉴定。通过实时聚合酶链式反应（Quantitative Real-time Polymerase chain reaction,qPCR）对血清当中的外泌体 miR-21、miR-122 以及miR-126实际表达水平进行表征,应用Prism以及SPSS分析获取到的数据。统计学意义的阈值设置为p<0.05。结果:血清外泌体miR-21的表达水平在UA组相较于对照组有降低（p<0.05）,AMI组相较于对照组出现明显降低（p<0.001）,AMI组相较于UA组其表达无明显改变。血清外泌体miR-126的表达水平在UA组相较于对照组出现明显升高现象（p<0.001）,AMI组较对照组明显升高（p<0.001）,AMI组相较UA组表达出现升高（p<0.01）。血清外泌体miR-122的表达水平在UA组较于对照组出现明显升高现象（p<0.001）,AMI组相较于对照组表达明显升高（p<0.001）,AMI组相较于UA组其表达也发现明显升高（p<0.001）。皮尔逊分析表明,血清外泌体miR-21,miR-122和miR-126与年龄、性别、心率、收缩压、舒张压、肌酐、氨基末端脑钠肽前体（N terminal pro B type natriuretic peptide,NT-proBNP）、血糖、高密度脂蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白和甘油三酯不具备相关性（P>0.05）。与对照组比较,血清外泌体miR-21在AMI组的接收者的操作下的曲线面积（Area Under Curve,AUC）为 0.8422（P<0.0001）,在 UA 组为 0.824（P<0.0001）。血清外泌体 miR-126 在 AMI 组的 AUC 为 0.8489（P<0.0001）,UA 组为 0.7815（P=0.0005）。血清外泌体 miR-122 在 AMI 组的 AUC 为 0.924（P<0.0001）,UA组为 0.765（p<0.0001）。根据Gensini评分,血清外泌体miR-21水平与UA患者（r=0.1329;95%CI=-0.3427-0.3659;P=0.9425）和 AMI 患者（r=0.0882;95%CI=-0.2576-0.4140;P=0.6199）其Gensini评分无相关性。血清外泌体miR-122水平和UA患者（r=0.591,P=0.0002）的Gensini评分显示出正相关关系,和AMI患者（r=0.235,P=0.203）的Gensini评分无相关性。血清外泌体miR-126水平与UA患者（r=0.7137,P<0.0001）和 AMI 患者（r=0.6028,P=0.0003）的 Gensini 评分呈正相关。结论:1.血清外泌体miR-122和miR-126可能作为AMI及UA诊断的生物标记物。2.血清外泌体miR-21可能充当ACS的生物学诊断标记物。3.血清外泌体miR-126水平越高可能ACS患者冠脉狭窄程度越重。血清外泌体miR-122水平-越高可能UA患者冠脉狭窄程度越重。