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目的非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是世界上主要的慢性肝病之一,但对其发病的膳食预防及研究机制仍处于不断探索中。本研究采用体外NAFLD细胞模型,观察枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对NAFLD细胞的脂质沉积形成、氧化应激水平及UCP2表达水平的影响,探讨LBP改善氧化应激的可能调控机制,为临床应用LBP预防NAFLD提供理论支撑。方法 本研究用含10%胎牛血清的RPMI1 640培养基进行L02人正常肝细胞的体外培养,采用游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)混合物1 mM(油酸:棕榈酸=2:1)诱导L02细胞24h,建立体外NAFLD细胞模型;采用CCK-8法确定LBP对脂肪变性细胞作用的最佳浓度。实验细胞被分为五组:即1)正常对照组;2)NAFLD模型组:FFA在培养基终浓度为1mM;3)NAFLD模型组+30μg/ml LBP:FFA在培养基终浓度为1mM,LBP在培养基终浓度为30μg/ml;4)NAFLD模型组+1 00μg/ml LBP:FFA在培养基终浓度为1 mM,LBP在培养基终浓度为100μg/ml;5)NAFLD模型组+300μg/ml LBP:FFA在培养基终浓度为1 mM,LBP在培养基终浓度为300μg/ml;分别按各实验组的培养要求培养48h后,收集各组细胞进行相关实验指标的检测。采用油红“0”染色,观察光镜下的脂滴;用GPO-PAP酶法检测细胞内甘油三脂(Triglyceride,TG)、比色法检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(Glutataione,GSH)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、丙二醛(Malonydialdehyde,MDA),运用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western Blot检测各组L02细胞UCP2 mRNA和蛋白的表达水平。结果1.LBP干预剂量的选择:30μg/ml LBP浓度为低剂量组,100μg/ml LBP浓度为中剂量组,300μg/ml LBP浓度为高剂量组。2.油红“0”染色结果:倒置显微镜下观察发现,在正常L02细胞组可见稀少的脂滴,而造模组细胞内有大量的颗粒状脂滴被染成橘红色,分布在内膜边缘形成环状,LBP干预组能明显减少细胞内被红染脂滴。3.细胞内TG含量:与模型组比较,LBP高剂量组细胞内TG水平明显降低(P<0.05),LBP低、中剂量组细胞TG水平较模型组未明显降低(P>0.05);与正常组比较,模型组、LBP低剂量组细胞TG水平明显升高(P<0.05),LBP低、中剂量组细胞TG水平未明显升高(P>0.05)。4.细胞内MDA、SOD、CAT、GSH活性测定:与模型组相比,正常组、LBP低、中剂量组MDA水平明显下降(P<0.05),LBP低剂量组MDA水平未明显降低(P>0.05);与正常组比较,LBP低、中剂量组MDA水平升高(P<0.05),LBP高剂量组MDA水平未明显降低(P>0.05);LBP高剂量组MDA水平低于LBP低、中剂量组(P<0.05);与模型组比较,正常组、LBP高剂量组SOD、CAT、GSH水平升高(P<0.05),低、中剂量组未明显升高(P>0.05);与正常组比较,LBP低剂量组SOD、CAT、GSH水平升高(P<0.05),LBP中、高剂量组SOD、CAT、GSH水平未明显升高(P>0.05)。5.不同组细胞UCP2表达水平:与模型组比较,正常组、LBP中、高剂量组UCP2 mRNA、UCP2蛋白表达下降(P<0.05),LBP低剂量组UCP2 mRNA表达降低(P<0.05),LBP低剂量组UCP2蛋白表达未显著降低(P>0.05);与正常组比较,LBP中、高剂量组UCP2 mRNA、UCP2蛋白表达升高(P<0.05),LBP低剂量组UCP2 mRNA表达升高(P<0.05),而LBP低剂量组UCP2蛋白表达未显著升高(P>0.05);与LBP低剂量组相比,LBP中、高剂量组UCP2蛋白表达下降(P<0.05),LBP高剂量组UCP2 mRNA水平下降(P<0.05),LBP中剂量组UCP2 mRNA未明显降低(P>0.05);与LBP中剂量组比较,LBP高剂量组UCP2 mRNA、UCP2蛋白表达下降(P<0.05)。结论LBP可以改善NAFLD细胞氧化应激水平,可能通过下调UCP2表达来防治NAFLD。