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副结核病(Paratuberculosis)也称为副结核性肠炎，是一种常见的由副结核分枝杆菌感染引起的以牛、羊、鹿等反刍动物为主的慢性消耗性传染病。目前对该病尚无有效的治疗方法和预防措施，根除此病的唯一办法就是检出、隔离、淘汰。因此建立快速准确的检测方法非常必要。 根据GenBank中已公布的牛副结核分枝杆菌两个主要抗原MAP0862和MAP2154c的全基因序列，利用DNAstar软件和BepiPred1.0在线预测软件对MAP0862和MAP2154c进行预测分析，筛选出抗原指数高的抗原表位基因，将基因序列合成得到融合基因PUC-K-map0862-2154c。以此基因为基础，构建了重组表达质粒pET0862-2154c，将其转化至克隆菌株E.coli DH5α中。提取阳性大肠杆菌pET0862-2154c/DH5α质粒进行鉴定。正确的重组质粒pET0862-2154c转化至表达菌株E.coli Rosetta(DE3)中，经IPTG诱导后，表达的重组蛋白MAP0862-2154c分子质量约为29kDa(含约8 kDa pET-28a(+)的肽段）;纯化后的重组蛋白MAP0862-2154c具有良好的抗原性。 选用7周龄的BALB/c小鼠，用纯化的重组蛋白进行免疫试验，小鼠血清的ELISA抗体效价大于1∶6400，说明该重组蛋白免疫原性好。 将纯化的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为包被抗原，建立了牛副结核抗体的间接ELISA检测方法。通过各步反应条件的优化，最终确定了该方法的最佳反应条件:抗原最适包被浓度为1μg/mL;抗原经4℃包被过夜;最佳封闭条件为含2％明胶的CBS，37℃封闭2h;最适稀释液为含0.5％明胶的PBST;最适血清稀释度为1∶800，37℃作用1h;1∶100000为酶标二抗的最佳稀释度，37℃作用45min;底物于37℃避光显色15 min。该方法与牛布氏杆菌病、牛病毒性腹泻和牛传染性鼻气管炎病阳性血清不发生交叉反应，批内和批间重复性试验的变异系数都小于10％，与市售检测牛副结核抗体ELISA试剂盒相比特异性为93％、敏感性为89％、符合率为91％，证实本方法具有较好的特异性和重复性，为检测牛副结核分枝杆菌提供了一种简便的血清学检测方法。