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生长激素受体基因是公认的调控动物生长发育的关键基因之一,其外显子氨基酸编码区引起生长激素受体氨基酸改变的SNP位点,必然会影响生长激素受体结构的改变,从而影响GHR与GH之间的结合,进而影响动物的生长发育。本实验以波尔山羊(202只)为主要研究对象,马头山羊为参考对象(20),对生长激素受体基因外显子4、5、6、7、10进行PCR扩增,并利用PCR-SSCP技术进行了多态性的检测,以期寻找到影响生长激素受体氨基酸组成的SNP位点。本研究首先根据GnenBank上山羊GHR基因的序列信息,并运用在线引物设计软件Primer3(http://frodo.wi.mit.edu/)设计各外显子相应的引物;然后利用PCR技术扩增目的片段,并通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段是否与目的片段长度相一致;再利用DNA回收试剂盒回收目的片段,混合8-10个样本进行目的片段序列测定;根据测定的结果寻找SNP位点,如果发现多态性位点,就可根据测序的结果寻找合适的内切酶进行多态性位点的验证,基因分型以及分型后基因型和性状间的关联分析等研究。本实验在测序之中未发现多态性位点,为了确定其可靠性,将扩增的目的片段进行了SSCP多态性分析。研究结果如下:1.exon 4研究结果:PCR目的片段包含外显子4所有基因序列,测序结果与引物设计参考序列AY739707(Maj and Zwierzchowski 2006)比对显示,与参考序列外显子碱基完全相同;PCR-SNCP检测也显示本研究的样本内未发现基因多态性位点。2.exon 5研究结果:根据GeneBank序列DQ179241自行设计引物,该引物的目的片段包含了外显子5所有的基因序列,扩增目的片段长度与预测长度一致。3.exon 6研究结果:GeneBank序列DQ179242自行设计引物,外显子6全部序列均包含在目的片段内。目的片段长度与预测一致。4.exon 7研究结果:根据序列DQ179243设计引物,外显子序列均位于目的片段之中,琼脂糖凝胶检测目的片段长度与设计长度相一致。5.exon 10研究结果:DQ179245设计引物,目的片段为外显子第108碱基至656位碱基,片段长549个碱基。琼脂糖凝胶检测扩增片段与设计长度相一致。这5个目的片段先混合样本测序以寻找SNP位点,测序结果均未发现多态性位点,PCR-SSCP检测也证实样本内确实不存在GHR基因的外显子4、5、6、7、10的多态性位点。