告达庭通过ROS/JNK信号通路诱导睾丸癌细胞自噬的研究

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lvzhenzhuo112
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目的:随着中医药研究的逐步发展,中西医结合的综合治疗方式取得了良好的疗效,已经成为多种肿瘤治疗的首选。告达庭是从萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消(即:白首乌)的根茎中提取的一种C21甾体苷元,白首乌在中国具有悠久的药用历史,且有着广泛的药理作用。临床实践和实验研究发现告达庭在抗炎症、抗氧化、抗肿瘤、抗突变等方面具有重要作用。本研究以睾丸癌细胞系NCCIT和Tcam-2为研究对象,探讨告达庭诱导睾丸癌细胞自噬的发生及其分子机制,为进一步研究告达庭的抗肿瘤作用提供实验依据。方法:本论文用梯度浓度的告达庭处理睾丸癌细胞系NCCIT和Tcam-2,通过MTT实验和克隆形成实验研究告达庭对睾丸癌细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色实验检测细胞凋亡;通过转染GFP-LC3质粒研究告达庭对睾丸癌细胞自噬流的作用;2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(DCFH-DA)染色法检测告达庭对细胞内活性氧产生的影响。结果:实验结果表明与对照组相比,分别用0~75μM浓度梯度告达庭处理睾丸癌细胞0~72 h,告达庭可以明显抑制睾丸癌细胞增殖,并呈现时间和浓度梯度依赖性。Hoechst 33258染色实验检测细胞凋亡,实验观察到告达庭诱导睾丸癌细胞出现凋亡小体,发生细胞凋亡。通过转染GFP-LC3质粒实验发现梯度浓度告达庭处理睾丸癌细胞可显著增加细胞内自噬小体的产生。通过2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(D CFH-DA)染色实验发现告达庭促进睾丸癌细胞内活性氧(ROS)的产生。蛋白质免疫印迹实验结果表明告达庭可以促进LC3-Ⅱ、beclin1等自噬蛋白以及p-JNK、p-ERK、p-p38等JNK信号通路蛋白的表达,并且在SP600125(JNK抑制剂)或者N-acetylcysteine(NAC,ROS抑制剂)的作用下,告达庭对睾丸癌细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和beclin1的促进作用均被减弱。结论:告达庭可以抑制睾丸癌细胞增殖和迁移能力,促进其凋亡,并且可以通过激活ROS/JNK信号通路诱导睾丸癌细胞自噬的发生。
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