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目的1.建立一种同时检测尿液非硫酸化和硫酸化胆汁酸代谢轮廓的超高液相色谱-三重四级杆飞行时间质谱(UPLC-Triple-TOF/MS)方法。2.采用UPLC-Triple-TOF/MS对正常妊娠组、轻度和重度妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP)患者尿液胆汁酸代谢轮廓进行分析,并运用经典判别分析以期获得最优的ICP诊断模式,寻找潜在的生物标志物,为临床ICP的诊断、鉴别诊断及分度提供依据。方法1.色谱条件：色谱柱Kinetex XB-C18 (50x 2.1 mm,1.7 μm),柱温：30℃,流速：0.2 ml/min。流动相A:15mmol/L醋酸铵,B：乙腈,梯度洗脱。质谱条件：电离子喷雾源(ESI),采用负离子模式扫描,以各胆汁酸母离子质量数±0.05 Da为目标离子进行子离子扫描,并以母离子作为定量离子。内标标准曲线法定量,进样量5μl,检测时间20min。2.用Bond lut 18固相萃取小柱进行尿液样品预处理。3.采用Peakview数据处理软件利用MS和MS/MS的精确质量数据、特征碎片离子及同位素等信息,并与已知的胆汁酸比对,初步确定胆汁酸的种类。4.采用UPLC-Triple-TOF/MS法对26例正常孕妇,14例轻度ICP患者,14例重度ICP患者进行尿液胆汁酸代谢轮廓分析,并运用经典判别分析方法获得最优的ICP诊断与分度模式,筛选出ICP灵敏、特异的生物标志物。结果1.有标准品的28种非硫酸化和1种硫酸化胆汁酸基本实现基线分离,通过鉴定初步认识到尿液中40种可能硫酸化胆汁酸和17种与已知非硫酸化胆汁酸存在同分异构的代谢物。2.尿液胆汁酸的线性范围为：0.020-20μmol/L,r为0.9925-1.0000,具有良好的相关性,最低检测限0.001 μmol/L。该方法的日内变异系数均小于17.8%,日间变异系数均不超过25.9%,各物质在不同浓度下均获得相对满意的回收率。3.与正常妊娠组相比,轻度和重度ICP组患者尿液非硫酸化与硫酸化胆汁酸均有不同程度的增高,而硫酸化胆汁酸的增加更为显著；尿液结合型胆汁酸中,牛磺结合型胆汁酸较甘氨结合型胆汁酸增加更为显著。4.对于有标准品的胆汁酸,与正常妊娠组相比,轻度ICP组GDCA、ω-TMCA和TCA显著增高,GCDCA和GCA极显著增高,重度ICP组α-TMC A、THC A、GHC A、GC A和TLCA-S显著增高,TUDCA和ω-TMCA极显著增高；与轻度ICP组相比,重度ICP组TUDCA、 co-TMCA、THCA和TLCA-S显著增高。5.三组人群尿液中共检测到27种可能的硫酸化胆汁酸与15种已知非硫酸化胆汁酸的同分异构体代谢物,组间存在差异的主要有TBA-S、GBA-S、TCA-S、GCA-S、GLCA-S及TBA、GBA、TCA同分异构代谢物。6.经典判别分析表明以本方法所检测的三组人群中有差异的40种胆汁酸为预测变量,正常妊娠组、轻度ICP组和重度ICP组的预测成功率分别为96.2%,92.9%,92.9%,判别函数对初始分组案例94.4%进行了正确分类。7.联合VIP值、p(corr)值和组间存在差异的胆汁酸指标综合评价分析筛选出TBA3、TBA-S2、TUDCA、TCA5、TCA4和ω-TMCA对ICP的诊断和分度有重要价值,可能是临床ICP诊断和分度潜在的生物标志物。结论1.本研究建立了UPLC-Triple-TOF/MS分析尿液胆汁酸代谢轮廓的方法,实现了尿液中非硫酸化和硫酸化胆汁酸代谢轮廓的同时测定。2.通过对正常妊娠组、轻度ICP组和重度ICP组患者尿液胆汁酸代谢轮廓分析,运用经典判别分析能够对三组人群进行正确分类,并发现临床ICP诊断及分度潜在的胆汁酸代谢物。