【摘 要】
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研究目的:探索胃癌中miR-154-3p对SIRT1的调控作用及影响胃癌发展的机制。研究方法:qRT-PCR和Western Blot检测miR-154-3p和SIRT1在胃癌细胞系中的表达水平以及miR-154-3p对S
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研究目的:探索胃癌中miR-154-3p对SIRT1的调控作用及影响胃癌发展的机制。研究方法:qRT-PCR和Western Blot检测miR-154-3p和SIRT1在胃癌细胞系中的表达水平以及miR-154-3p对SIRT1的调控作用;双荧光素酶报告基因实验验证miR-154-3p与SIRT1 3’-UTR的结合作用;在胃癌细胞中过表达或抑制miR-154-3p后,利用CCK-8和细胞平板克隆实验检测细胞的增殖能力变化,细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移能力变化;qRT-PCR检测miR-154-3p在31例胃癌和癌旁患者组织标本中的表达差异,利用免疫组化染色分析SIRT1在18例上述标本中的表达差异;Western Blot检测在胃癌细胞系中转染miR-154-3p mimics或inhibitor后SIRT1下游蛋白NF-κB p65、ERK1/2和AKT磷酸化水平变化。研究结果:五种胃癌细胞系中,miR-154-3p和SIRT1的表达水平呈相反趋势;miR-154-3p对SIRT1的蛋白表达有负向调控作用,而不影响SIRT1的mRNA表达;双荧光素酶实验结果显示,miR-154-3p能结合SIRT1的3’-UTR;过表达miR-154-3p显著促进胃癌细胞的增殖及迁移能力,抑制miR-154-3p的表达则抑制胃癌细胞的增殖及迁移能力;与对照相比,miR-154-3p在胃癌组织样本中的表达显著上调,而SIRT1显著下调;过表达miR-154-3p能够上调NF-κB p65的磷酸化水平,但不能改变ERK1/2和AKT的磷酸化水平。研究结论:miR-154-3p通过靶向SIRT1的3’-UTR抑制SIRT1的转录后翻译,从而促进NF-κB p65活化来调节胃癌细胞的增殖和迁移。
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