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目的:大量研究发现维生素D可以缓解糖尿病及其并发症的发生发展,其可能的机制是维生素D通过刺激胰岛素分泌和增加胰岛素敏感性调节血糖。本课题组前期研究发现,1α,25(OH)2D3可以降低糖尿病小鼠的血肌酐和蛋白尿水平,进而减轻糖尿病小鼠的肾脏损伤,并对高糖引起的足细胞损伤有保护作用。然而,1α,25(OH)2D3在糖尿病脂质紊乱中的作用尚不明确。本研究在此基础上,进—步探索1 α,25(OH)2D3对肾小球足细胞脂代谢的影响。方法:本研究分为三个部分。(1)1α,25(OH)2D3对肾小球足细胞脂代谢的影响:实验分为四组,分别是对照组(control)、空白对照组(vehicle)、10-8M 1α,25(OH)2D3 处理组(D3 10-8 M)和 10-7M 1α,25(OH)2D3 处理组(D3 10-7 M)。CCK-8测量足细胞活性,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。油红O染色检测细胞内脂滴聚集。相关试剂盒检测细胞内甘油三酯、胆固醇酯和总胆固醇的水平。Western Blotting和Real-time PCR检测相关脂肪酸合成蛋白脂肪酸合成酶(Fatty Acid Synthase,FASN)和胆固醇代谢蛋白固醇调节元件结合蛋白-2(Sterol Regulatory Element-binding Protein-2,SREBP-2)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP Cleavage Activating Protein,SCAP)的表达。(2)棕榈酸对肾小球足细胞脂代谢的影响:实验分别用不同浓度的棕榈酸(0、50、75、100 μM)处理肾小球足细胞。CCK-8检测棕榈酸处理后足细胞活性。油红O染色检测细胞内脂滴聚集。甘油三酯试剂盒检测经不同浓度的棕榈酸处理后足细胞内甘油三酯的含量。同时,分别用Western Blotting和Real-time PCR检测相关脂肪酸合成蛋白FASN和胆固醇代谢蛋白SREBP-2、SCAP的表达。(3)1α,25(OH)2D3对棕榈酸引起的肾小球足细胞内脂代谢紊乱的影响:实验分为四组,分别是对照组(control)、棕榈酸处理组(PA 50 μM)、棕榈酸联合10-8M的1α,25(OH)2D3处理组(PA+D3 10-8 M)和棕榈酸联合10-7 M的1 α,25(OH)2D3处理组(PA+D3 10-7M)。CCK-8检测细胞活性,油红O染色检测细胞内脂滴聚集,甘油三酯试剂盒检测经各组细胞内甘油三酯的水平。结果:(1)1α,25(OH)2D3对肾小球足细胞脂代谢的影响:1α,25(OH)2D3可以显著抑制足细胞的增殖并增加其凋亡(P<0.05)。同时,1α,25(OH)2D3可以降低足细胞内脂滴的聚集(P<0.05)并使细胞内的甘油三酯和胆固醇酯的水平均显著下降(P<0.05)。但是,1α,25(OH)2D3却增加了足细胞内总胆固醇的水平(P<0.05)。此外,经1α,25(OH)2D3处理后,足细胞内脂肪酸合成相关蛋白FASN、胆固醇代谢相关的SREBP-2和SCAP的蛋白和mRNA水平均显著下降(P<0.05)。(2)棕榈酸对肾小球足细胞脂代谢的影响:棕榈酸可以显著降低足细胞的活性,在0-100 μM的区间内存在明显的剂量反应关系(P<0.05)。棕榈酸可以显著增加足细胞内脂滴的聚集(P<0.05)并使细胞内甘油三酯的含量明显升高(P<0.05),但脂肪酸合成相关蛋白FASN的蛋白表达变化不明显,仅在基因水平上有一定程度的升高(P<0.05)。此外,足细胞内SREBP-2和SCAP的蛋白表达和mRNA水平均在棕榈酸处理48小时后有了一定的下降(P<0.05)。(3)1α,25(OH)2D3对棕榈酸引起的肾小球足细胞脂代谢紊乱的影响:1α,25(OH)2D3对由棕榈酸造成的足细胞活性降低无明显作用。1α,25(OH)2D3和棕榈酸联合处理后细胞内的脂滴与棕榈酸单独处理无明显差别,同时,细胞内甘油三酯水平与棕榈酸单独处理组相比也无明显差别。结论:(1)1α,25(OH)2D3降低了肾小球足细胞内的脂质聚集的同时却增加了细胞内总胆固醇的含量。说明,1α,25(OH)2D3可以影响肾小球足细胞内的脂质代谢。(2)棕榈酸增加了足细胞内的脂质聚集,影响了细胞内脂质的代谢。(3)1α,25(OH)2D3不能对因棕榈酸造成的肾小球足细胞的损伤和细胞内的脂质紊乱产生影响。