论文部分内容阅读
目的：研究顺铂联合替吉奥体外对人胃癌MGC-803细胞株的抗肿瘤作用,并对其机制进行初步探讨,为顺铂联合替吉奥提供应用于临床提供实验基础以及理论依据。方法：首先应用四氮唑盐(MTT)法进行初步试验,检测顺铂联合替吉奥对体外培养的人胃癌MGC-803细胞株的抗肿瘤作用的影响；之后再进行形态学观察,主要方法为应用倒置显微镜、细胞图片后进行HE染色以及透射电镜对胃癌MGC-803进行观察；然后进行周期分布相和细胞凋亡率的检测,其方法为采用流式细胞仪检测两种药物联合应用后胃癌MGC-803的作用结果；在各种结果测定完毕后进行机制探讨,方法为利用免疫组织化学法,检测Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9三种蛋白的表达情况,深入探讨顺铂联合替吉奥对胃癌MGC-803细胞株诱导凋亡的机制。结果：(1)四氮唑盐(MTT)法结果显示：顺铂联合替吉奥对胃癌MGC-803细胞株具有抗增值作用,并且其抑制率与用药剂量呈正相关,随着药物浓度增加抑制率亦呈上升趋势(P<0.01)；(2)HE染色结果显示：顺铂联合替吉奥在终浓度为20μg/ml时作用于胃癌MGC-803细胞后出现凋亡形态学改变,可见有部分细胞形成凋亡小体。细胞可见核固缩、核碎裂以及核溶解等凋亡表现；(3)倒置显微镜结果显示：顺铂联合替吉奥20μg/ml作用后细胞出现凋亡形态学变化：细胞失去原来的多角形结构,变为圆形凋亡细胞；甚至可见部分细胞完全破碎,成为死亡细胞,在镜下呈碎片表现；(4)透射电镜观察结果显示：顺铂联合替吉奥20μg/ml作用于胃癌MGC-803细胞后,细胞核染色质聚集成团块状结构,可见染色质部分有断裂的表现,可有凋亡小体形成；(5)流式细胞仪检测结果进一步表明：顺铂联合替吉奥可以诱导胃癌MGC-803发生凋亡,细胞周期蛋白检测结果表现出G0/G1期比值显著增加(P<0.01),而S期和G2/M期比值下降,这说明细胞周期阻滞出现在G0/G,期；(6)免疫细胞化学机制探讨结果表明：顺铂联合替吉奥作用后与对照组(PBS)相比较Caspase—3、Caspase-8和Caspase-9表达呈增加趋势,结果显著(P<0.01)。结论：1、顺铂联合替吉奥对胃癌MGC-803细胞株具有抗增殖作用。2、由于大量凋亡小体或者凋亡细胞的出现,可以证明顺铂联合替吉奥对胃癌MGC-803抗增殖作用在20μg/ml时主要是导致凋亡。3、顺铂联合替吉奥对胃癌MGC-803细胞株的抑制增殖和诱导凋亡,其机理依据实验证明主要可能是抑制在细胞G0/G1期应用顺铂和替吉奥可以组织此期细胞周期；这两种药物联合应用可以增强Caspase-8、spase-9和Caspase-3蛋白表达,可能是启动细胞凋亡,并且执行的死亡受体通路。