灵芝和杏鲍菇菌种的超低温保存技术研究及保藏效果的鉴定

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本文对致远号美芝和致远号杏鲍菇进行正交试验处理,具体的处理方式如下:选择降温方式、保护剂和解冻方式设计三因素三水平的正交实验来进行菌种的保藏,-80℃超低温保藏一个月后进行保藏效果的鉴定,即将保藏后的菌种于PDA培养基上培养并测定菌丝生长指标。菌丝生长指标主要包括:菌种萌发率和萌发时间的测定,菌种菌丝体生长速度和长势的测定,初步判断适合菌种保藏的适宜条件;栽培出菇后进行农艺性状的比较,主要包括子实体形态学指标测量(菌柄长度,产量等),子实体营养成分测定,活性成分测定,最后进行菌丝体ISSR分子标记分析,探讨-80℃超低温保藏对不同菌种的产量,品质和遗传稳定性的影响,以期找到致远号杏鲍菇和美芝-80℃超低温保藏的适宜条件,为食用菌菌种-80℃超低温保藏技术提供理论基础。得到的结论如下:(1)-80℃超低温保藏对灵芝菌丝体生长情况影响最小的是1号组合是A1B1C1,降温方式采用-4℃--20℃--80℃,保护剂采用10%二甲亚砜,-20℃--4℃-常温解冻。三个因素对灵芝菌丝体生长情况的影响大小是保护剂>解冻方式>降温方式。-80-C超低温保藏对杏鲍菇菌丝体生生长情况影响最小的组合是A1B2C2,即采用4℃--20℃--80℃方式降温,10%甘油做保护剂,-4℃-常温解冻。三个因素对杏鲍菇菌丝体生长情况的影响大小是降温方式>保护剂>解冻方式。(2)-80-℃超低温保藏对灵芝的农艺性状的不同方面的影响不同。对灵菌盖直径和菌盖厚度的影响大小都是保护剂>降温方式>解冻方式。对于灵芝菌柄长度的影响,起主要作用的也是保护剂,次要因素是解冻方式。对灵芝产量影响最小的是A2B2C3组合,-40℃--80℃低温保藏,10%甘油做保护剂,37-℃水浴解冻。三个因素对灵芝产量影响大小为:保护剂>降温方式>解冻方式。-80-℃超低温保藏对杏鲍菇农艺性状和产量影响大小都是:保护剂>解冻方式>降温方式。对产量影响最小的是A2B2C3,采用-40℃--80℃低温保藏,10%甘油做保护剂,37℃水浴解冻。(3)-80-℃超低温保藏对灵芝活性成分和杏鲍菇营养成分影响不明显。对灵芝多糖含量影响最小的组合是4号处理A2B1C2,三个因素对灵芝多糖影响大小顺序为:保护剂>解冻方式>降温方式。对灵芝三萜的含量影响最小的是4号处理A2B1C2,三个因素对灵芝三萜影响大小顺序为:保护剂>解冻方式>降温方式。对于杏鲍菇多糖含量,影响最小的组合1号处理,三个因素对其影响大小顺序为:解冻方式>保护剂>降温方式。对于游离氨基酸含量,影响最小的是4号处理三个因素对其影响大小顺序为:降温方式>保护剂>解冻方式。对于蛋白质含量,影响最小的是4号处理,三个因素对其影响大小顺序为:解冻方式>保护剂>降温方式。(3)-80℃超低温保藏对灵芝和杏鲍菇的遗传稳定性没有产生显著影响。实验对菌丝体DNA进行ISSR扩增,进行电泳分析,只有很少的特异性条带出现。其中,灵芝3号、6号和9号处理受影响相对较大,杏鲍菇的2号、6号、9号处理受影响相对较大。比较两个菌种,灵芝总的特异性条带所占的比例要略高于杏鲍菇特异性条带所占的比例,这说明,对于不同的菌种,对于超低温的抵抗力不同。
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