Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠制备技术的优化及用于DNA分离纯化的研究

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目的:为建立以磁分离技术为核心的分离系统,探索Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠的制备条件,并以多种材料DNA提取的方法测试磁珠的生物学应用性能,尤其探索了对于复杂PCR产物纯化条件下片段筛选的技术可行性。方法:本研究分为两部分内容:1、Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠的制备:本篇论文首先以现如今广泛应用的共沉淀法制得Fe304超顺磁性的磁流体,再以溶胶凝胶_工艺制备出Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠,尤其通过分别用SiO2包裹磁流体一次和两次制备出两种磁珠,以它们对DNA的回收量和回收率作为生物学应用指标进行磁珠的性能判定。2、Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠纯化DNA的研究:Fe3O4/SiO复合纳米磁珠与核酸物质进行提纯测试实验,包括质粒DNA提取和分离、PCR产物纯化,对磁珠的吸附和洗脱DNA性能进行研究,其中重点研究了如何调整“磁珠缓冲液”体系以实现对于不同大小DNA片段的选择性回收。结果:1、本论文成功制备出Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠,将其应用于分子生物学实验中得出,该磁珠提取的质粒DNA的回收量和回收纯度与商用试剂盒相当甚至超过它,并适应于下游分子生物学实验应用的要求。2、在使用Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠进行扩增产物的纯化回收的实验中,通过对“磁珠+缓冲液”体系的研究,成功建立了对不同片段长度DNA的选择性回收的技术体系:以“磁珠溶液体积:DNA样品体积”的体积比为参数,该参数为0.4-0.5时能有效去除400bp及其以下DNA片段;该参数为0.6时能有效去除200bp及其以下DNA片段;该参数为0.7-1.2时能有效去除100bp及其以下DNA片段;该参数为1.3-1.8时能有效去除100bp以下DNA片段。
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