DADS诱导人白血病HL-60细胞自噬性细胞死亡

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:fsongyifa
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目的:检测DADS诱导人白血病HL-60细胞的自噬性死亡作用,为优化DADS抗白血病作用,及DADS临床应用提供实验理论依据。  方法:用CCK-8法检测DADS对HL-60细胞增殖的影响;用Western blot法检测DADS处理后HL-60细胞自噬标志性蛋白LC3B-Ⅱ表达的变化;用自噬抑制剂3-MA联合DADS处理HL-60细胞后检测细胞增殖及诱导自噬作用,Western blot法检测细胞内自噬标志性蛋白LC3B-Ⅱ和p62,凋亡标志性蛋白Clevead PARP的表达。  结果:CCK-8法检测HL-60细胞被不同DADS浓度0(溶媒)、25、50、75、100和125uM处理72h后,细胞增殖率为(99.44±4.32)%、(56.39±6.53)%、(47.53±3.21)%、(36.61±2.86)%、(32.22±5.92)%、(30.41±6.35)%,DADS对HL-60细胞的增殖抑制作用明显。Western blot检测0(溶媒)、25、50、75和100uM浓度的DADS处理HL-60细胞72h后,自噬标志性蛋白LC3B-II的表达情况随着DADS处理浓度增高而成正相关,说明在此DADS处理浓度区间内,HL-60细胞自噬水平与DADS浓度正相关。自噬抑制剂联合DADS处理HL-60细胞,Western blot检测结果显示随着3-MA处理浓度的增大,自噬标志性蛋白LC3B-II表达逐渐减弱,说明3-MA能有效减弱DADS诱导的自噬作用。CCK-8检测溶媒组(DMSO)、0uM组、25uM组、100uM组和空白对照组共5组3-MA处理后HL-60细胞增殖的影响,结果表明25、50uM处理条件下HL-60细胞增殖率为(98.57±2.35)%、(97.87±2.71)%,与溶媒组相比无统计学意义,而100uM处理条件下HL-60细胞增殖率为(90.15±3.55)%与溶媒组相比差异具有统计学意义,得知50uM是本实验3-MA最佳处理浓度。用50uM DADS和50uM3-MA设立DADS-/3-MA-(溶媒组)、DADS+/3-MA-、DADS+/3-MA+和DADS-/3-MA+四组实验组,以及空白对照组处理HL-60细胞。用CCK-8法检测发现四组对比空白对照组的HL-60细胞增殖率分别为:(98.58±1.94)%、(53.49±3.63)%、(68.61±6.15)%、(98.86±5.99)%,结果说明3-MA能有效的减弱DADS对HL-60细胞的增殖抑制作用。用Western blot检测3-MA联合DADS处理HL-60细胞后凋亡标志性蛋白Clevead PARP和自噬标志性蛋白LC3B-Ⅱ、p62的表达情况,与溶媒组(DADS-/3-MA-)相比,单DADS处理组(DADS+/3-MA-)的LC3B-Ⅱ和Cleaved PARP的表达明显增强,而p62蛋白表达明显减弱,说明DADS能同时诱导HL-60细胞自噬和凋亡的发生。DADS与3-MA联合处理组(DADS+/3-MA+)与单DADS处理组(DADS+/3-MA-)相比,LC3B-Ⅱ蛋白表达减弱,p62蛋白表达增强,但Cleaved PARP蛋白表达变化不显著,由此可以得知自噬抑制剂3-MA能够减弱DADS诱导的自噬水平,但对DADS诱导细胞的凋亡无影响。  结论:1.自噬抑制剂3-MA抑制自噬可减弱DADS对HL-60细胞增殖抑制作用;2.DADS可诱导HL-60细胞自噬相关性死亡,且可能不依赖caspase凋亡途径。
其他文献
目的:   所谓自噬是指细胞利用溶酶体降解自身成分的过程,被降解成分包括细胞质和细胞器。细胞自噬是一种分解代谢过程,它可以使细胞循环再利用细胞浆内的成分,因此从节省生