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研究背景与目的：神经病理性疼痛是一种常见的慢性疼痛综合征,发病率高且伴有抑郁、焦虑和睡眠障碍等,严重影响病人的生活质量,但由于神经病理性疼痛发病机制复杂,常规镇痛药、甚至麻醉性镇痛药临床治疗效果不佳,因此阐明其发病机理,寻找有效的且作用靶标明确的治疗药物是当前关注的热点。目前基础与临床研究表明抗抑郁药能够在减轻疼痛的同时改善患者情绪和睡眠,多年来应用于用于神经病理性疼痛的临床治疗并取得良好临床效果,其中5-HT/NE双重重摄取抑制剂(SNRIs)类代表药物度洛西汀已获得FDA批准用于糖尿病周围神经痛、肌纤维痛、慢性肌肉骨骼痛等慢性疼痛综合征的治疗,其销售额巨大并呈逐年增长趋势,但近几年来临床不良反应监测发现度洛西汀引起肝脏毒性,限制其临床应用。因此研发新型、高效、低毒且具有我国自主产权的SNRIs并应用于抗抑郁和神经病性疼痛的药物是我课题组的研究目标。我们在前期研究工作中,以度洛西汀为先导化合物,以降低肝损伤为目标,合成并筛选获得了新型强效且作用均衡的SNRI阿姆西汀,实验证明其肝脏毒性显著低于度洛西汀,并且在急性疼痛和炎症性疼痛动物模型中表现明显的镇痛作用。在本研究中,我们采用多种疼痛动物模型来评价阿姆西汀的镇痛作用,并从单胺递质调节、促炎症细胞因子释放和胶质细胞活化等方面探讨其镇痛作用的分子机制,为阿姆西汀在神经病理性疼痛中的临床应用以及简明其镇痛作用机制提供理论依据。研究方法：采用小鼠醋酸扭体实验、福尔马林致痛实验评价阿姆西汀对腹部炎性疼痛、急性疼痛和持续性疼痛的镇痛作用;采用大鼠坐骨神经分支选择性损伤模型(sciatic nerve injury, SNI)和坐骨神经慢性压迫模型(chronic constriction injury,CCI)评价阿姆西汀对坐骨神经损伤诱导的神经病理性疼痛的镇痛效果；采用腹腔注射链脲霉素(streptozocin, STZ,60 mg/kg, i.p.)诱导大鼠糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain, DNP)的模型,评价阿姆西汀对糖尿病神经病理性疼痛的影响;连续3天皮下给予利血平(1 mg/kg, s.c.)诱导大鼠纤维肌痛模型,评价阿姆西汀对纤维肌痛(临床抗抑郁药镇痛的主要适应症)的镇痛作用。在CCI模型中,分别采用连续3天给予对氯苯丙氨酸(PCPA,150mg/kg, i.p.)诱导5-HT耗竭和连续两次间隔23 h给予α-甲基对位酪氨酸甲酯(AMPT, 200mg/kg, i.p.,)诱导儿茶酚胺耗竭后,评价阿姆西汀单次给药对机械异常性疼痛的镇痛作用。纤维肌痛模型大鼠镇痛活性评价结束后,采用高效液相色谱法测定纤维肌痛模型大鼠脊髓和脑组织单胺递质水平。采用ELISA法测定CCI模型和DNP模型大鼠脊髓炎症因子的表达水平；采用western blot法测定CCI模型和DNP模型大鼠脊髓小胶质细胞标志物离子钙结合受体分子1(ionized calcium binding adaptor molecule 1, iba-1)、星型胶质细胞标志物胶质细胞纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein, GFAP)、促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases, MAPK)言号通路分子p38、 JNK、ERK磷酸化水平和NF-KBp65的表达水平。研究结果：1.阿姆西汀对醋酸引起的腹腔炎性疼痛具有镇痛作用,其ED50(±95%CL)为2.01(0-7.06) mg/kg,相同条件下对照药度洛西汀ED50为10.03(6.94-13.10)mg/kgo2.阿姆西汀能显著减轻福尔马林所致急性和持续性疼痛,ED50 (±95% CL)分别为：急性疼痛9.89(6.55-13.23) mg/kg,慢性疼痛4.74 (2.84-6.64) mg/kg;对照药度洛西汀在该模型中的镇痛作用ED50 (±95% CL)分别为：急性疼痛19.65(14.52-24.79) mg/kg,慢性疼痛10.06 (9.13-11.00) mg/kg。3.在SNI模型中,阿姆西汀2.5-10 mg/kg可剂量依赖性减轻大鼠机械异常性疼痛。4.在CCI模型中,单次和连续2周给予阿姆西汀2.5-10 mg/kg均可显著减轻CCI模型大鼠机械异常性疼痛和热痛觉过敏,对照药度洛西汀10mg/kg在该模型中对机械异常性疼痛无效,仅能减轻热痛觉过敏。5.阿姆西汀2.5-10 mg/kg长期给药1至4周可显著降低糖尿病神经病理性疼痛模型大鼠机械痛觉过敏。6.阿姆西汀30 mg/kg可显著性降低利血平诱导的纤维肌痛大鼠机械痛觉过敏,对照药度洛西汀30 mg/kg对机械痛觉过敏无效,50 mg/kg可减轻疼痛。7.给予PCPA耗竭5-HT、给予AMPT耗竭儿茶酚胺后均可取消阿姆西汀减轻CCI模型大鼠机械异常性疼痛的作用8.阿姆西汀30 mg/kg和度洛西汀50 mg/kg显著升高纤维肌痛模型大鼠脊髓、下丘脑、丘脑和前额皮层5-HT和NE水平,降低5-HT代谢率(5-HIAA/5-HT),对DA水平和DA代谢率(DOPAC/DA)无影响。9.CCI模型大鼠脊髓炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高,小胶质细胞标志物iba-1和星型胶质细胞标志物GFAP表达增多,给予阿姆西汀后能显著降低CCI大鼠脊髓TNF-α、IL-1β、IL-6水平,减少iba-1和GFAP表达水平,并下调CCI模型大鼠脊髓p-p38和p-ERK和NE-κ Bp65水平。10.在DNP模型大鼠脊髓炎症因子TNF-α、IL-1β水平显著升高,脊髓iba-1表达升高,而GFAP无显著升高,给予阿姆西汀后能明显降低脊髓TNF-α、IL-1p水平,降低脊髓小胶质细胞标志物表达水平,减少p-p38和p-ERK磷酸化。研究结论阿姆西汀对腹腔炎性痛、福尔马林诱导的急性和持续性疼痛、坐骨神经损伤诱导的机械异常性疼痛和热痛觉过敏、糖尿病神经病理性疼痛和纤维肌痛均具有明显的镇痛作用。其作用机理可能与增强疼痛下行抑制传导通路5-HT和NE神经传递以及与抑制脊髓胶质细胞活化和促炎症细胞因子释放有关,同时阿姆西汀可能是通过抑制MAPK信号通路分子p38和JNK磷酸化及NF-κ B的活化起到抗炎作用来发挥其作用。综上所述,阿姆西汀作为均衡强效的SNRI类潜在药物,未来对神经病理性疼痛临床治疗具有良好的潜在应用价值。