【研究背景】胶质瘤是中枢神经系统中最常见的原发性人类恶性肿瘤之一,发病率高、术后容易复发、5年生存率低、预后差为其主要的特点。胶质瘤目前的治疗方法主要为手术治疗辅以术后的放疗以及化疗(例如:替莫唑胺),但治疗效果并不理想。因此,深入的研究胶质瘤的发生及发展的分子机制可为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法,但是胶质瘤发生和发展的分子机制目前在很大程度上是尚未明确的。之前有研究表明Dok7在人脑胶质瘤组织中的表达相对于在正常脑组织中的表达是明显下调的,并且Dok7过表达会显着抑制胶质瘤细胞株U87在体外的增殖和集落形成,这为我们的下一步研究提供了一个新的方向。基于以上的研究结果,我们不禁要提出疑问:一、既然Dok7过表达会抑制胶质瘤细胞株U87在体外的增殖,那么Dok7过表达是否也会抑制胶质瘤细胞在体内的增殖;二、Dok7在人脑胶质瘤组织中的表达低于正常脑组织中的表达是受到了何种上游基因的调控?【研究方法】1.体外培养胶质瘤细胞株U87和U251,并在U87和U251细胞株中建立Dok7过表达(Dok7)和空载(vector)的稳转细胞株,研究Dok7过表达细胞株U251在体外的增殖能力;2.裸鼠成瘤实验中分组分别接种Dok7过表达或空载的U87稳转细胞株于雌性裸鼠左侧腋窝的皮下,定期详细记录各组裸鼠的肿瘤的生长情况,并对两组裸鼠肿瘤的体积做统计分析,40天后取不同组的肿瘤进行免疫组化分析以研究Dok7过表达对胶质瘤在体内增殖的影响;3.在体外培养的胶质瘤细胞株U87和U251中分别加入DNMT1的抑制剂5-Aza,研究5-Aza对胶质瘤细胞甲基化的影响及对Dok7的m RNA水平和蛋白质水平表达的影响。4.在体外培养的胶质瘤细胞系U87和U251中分别转染DNMT1敲减质粒,研究DNMT1对胶质瘤细胞甲基化的影响及对Dok7的m RNA水平和蛋白质水平的影响。【研究结果】1.Dok7过表达会抑制胶质瘤细胞株U251在体外的增殖能力;2.Dok7过表达组裸鼠肿瘤的体积明显低于空载组;3.加入DNMT1抑制剂5-Aza的U87和U251细胞的甲基化明显低于未加5-Aza的U87和U251细胞的甲基化,5-Aza组的Dok7m RNA水平和蛋白质水平的表达均明显高于空白对照组;4.转染DNMT1敲减质粒成功后,sh-DNMT1组胶质瘤的甲基化水平明显低于shcon组,sh-DNMT1组胶质瘤的Dok7m RNA水平和蛋白质水平的表达均明显高于shcon组。【结论】1.Dok7会抑制胶质瘤细胞在体内和体外的增殖能力;2.DNMT1介导Dok7的甲基化,抑制Dok7的表达。