昌吉市区规模化牛场BVDV-PI牛的检测及BVDV的分离鉴定

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牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种以病畜出现腹泻、流产、持续性感染(Persistently infected,PI)和免疫抑制为临床特征的接触性传染病。该病广泛存在于全国各个省市,给当地的养殖业带来巨大的经济损失。本研究旨在筛选出昌吉市区规模化牛场的BVDV-PI牛并进行分离得到BVDV新疆毒株。本文主要从以下三个方面开展了工作:(1)利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)从450份待检样品中初步筛选出22份BVDV阳性样品,阳性率为4.89%。(2)利用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real-time RT-PCR,Q-PCR)初步筛选出的BVDV阳性牛,并且在3周后筛选出BVDV-PI牛。结果显示,22份待检样品中共检出BVDV阳性样品19份,阳性率为86.36%;19份阳性样品中检测出14只BVDV-PI牛。(3)利用细胞培养试验、RT-PCR技术和直接免疫荧光抗体法从BVDV-PI牛中分离、鉴定出BVDV新疆毒株。结果显示,共分离获得14株BVDV毒株,其中,4株病毒为致细胞病变型(Cytopathogenic,CP)BVDV,病毒滴度为4.65×1051.98×107TCID50/0.1mL;10株病毒为非致细胞病变型(Non-cytop-athogenic,NCP)BVDV,病毒滴度为1.58×1047.65×108TCID50/0.1mL。综上所述,本研究为了解新疆昌吉地区牛群BVDV的流行情况提供背景资料,分离出的BVDV新疆毒株为BVDV疫苗的制备奠定物质基础。
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