基于水凝胶微流控系统的分离富集及检测血清中循环miRNA

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近年来,循环miRNA作为一种可以在血液中稳定存在的新型标志物逐渐进入人们的视野,miRNA参与细胞分裂分化以及基因表达水平调控,与肿瘤生成发展息息相关。但是人体中miRNA含量极少,循环miRNA存在的体液环境又极其复杂,因此miRNA的富集检测是近年来研究的重点难点。目前,传统的富集检测方法例如市面上的miRNA提取试剂盒以及商品化的磁珠等,价格昂贵并且提取富集效率不理想。本研究开发了一套水凝胶微流控体系通过微流体芯片制备包含磁流体的琼脂糖微液滴,经过冷冻、活化和表面偶联Ago2抗体,可以特异性的捕获富集血清中游离的Ago2-miRNA蛋白复合体。通过微流控方法制备的磁性琼脂糖微球,形态大小均一,磁性良好,并且能快速高效的富集到血清中的miRNA。经高温解离出miRNA,融化琼脂糖微球,再次生成包含目标分子的微液滴进行数字液滴PCR对miRNA进行定量检测。本实验通过微流平台完成,很大程度上节约了实验试剂用量,大大降低了实验成本,缩短了实验时间,提高了实验效率,并且隔离了外界,减少外界环境的污染。本平台所制备的琼脂糖微液滴和微球,通过实验证明可经历各种复杂的环境变化依旧保持形态不变,并且由于琼脂糖良好的生物活性,既可偶联各种功能分子进行多种富集提取实验,又可作为保存目标分子的单个反应器,进行各种下游处理分析,在生物富集检测及单分子单细胞分析领域具有极广的应用前景。
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