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背景和目的:近期研究表明AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)可以抑制肿瘤的转移,其机制可能和抑制TGF-β1(转化生长因子-β1)有关。TGF-β1是Treg细胞(Tregs,调节T细胞)分化的重要细胞因子,既往大量的研究发现,TGF-β1在肿瘤发生发展过程中扮演着重要的角色:本课题通过验证AMPK抑制肿瘤细胞TGF-β1的分泌,降低癌旁的Tregs的分化,并最终抑制肿瘤的免疫逃逸。材料方法:1、于2015年1月至2015年10月收集60例胃癌患者的肿瘤组织并分组,组织均来源于在南昌大学第一附属医院行根治性手术的患者,制成病理切片待用。2、用制好的病理切片,行免疫组化DAB法,测验各分组FOXP3和p-AMPK的表达情况。然后用spss 20.0分析不同分期的胃癌病人中表达FOXP3与p-AMPK的相关性。3、培养分化程度各异MKN28、SGC-7901和AGS胃癌细胞株,恶性程度依次升高,加入metformin(二甲双胍)处理,然后收集培养上清和胞浆蛋白,分别用ELISA和western blot的方法检测TGF-β1的分泌和胞内表达情况。4、将SGC-7901和构建的7901-LKB1(肝激酶B1)胃癌细胞株和Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞)行共培养5天,检测Jurkat表达FOXP3的情况,用IF(免疫荧光)观察FOXP3的表达情况。结果:1、FOXP3的表达量随胃癌淋巴转移分期的升高逐步递增,p-AMPK的表达量逐步递减。2、随着胃癌细胞株分化程度的增高,分泌型TGF-β1的量逐渐下降。并且加metformin后,TGF-β1的分泌下降,胞内检测到的TGF-β1也是如此。3、共培养实验表明,将7901和7901-LKB1细胞株分别与Jurkat细胞共培养,发现前者Jurkat细胞的FOXP3表达量高于后者。结论:1、FOXP3+Tregs和p-AMPK的表达随着胃癌淋巴结转移分期(N stage)的增加呈现负相关。2、Metformin可以通过激活AMPK,进而抑制TGF-β1的表达和分泌。3、AMPK的激活可以抑制TGF-β1的表达和分泌,进而影响Jurkat细胞的分化。