瘦素及其受体在哮喘BALB/c小鼠肺组织中的表达及布地奈德的干预作用

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaoyaosara
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目的:  建立OVA致敏和激发的哮喘小鼠模型;观察不同严重程度哮喘小鼠与正常小鼠肺组织中瘦素及其受体的表达变化;观察哮喘小鼠在布地奈德干预后肺组织中瘦素及其受体表达的变化。  方法:  4~6周龄,18~20g健康清洁级雄性Balb/c小鼠40只,随机分为正常对照组、诱喘3天组、诱喘7天组、布地奈德干预组。10μg卵白蛋白(ovalbumin,OVA)+1mgAI(OH)3+0.4mlNS混悬液腹腔注射对实验组进行致敏(第0、7、14天),1%OVA雾化激发(第21~23天)建立诱喘3天哮喘模型组,1%OVA雾化激发(第21~27天)建立诱喘7天哮喘模型组,并于激发阶段对诱喘7天组小鼠进行干预(雾化吸入布地奈德混悬液);正常对照组不给予任何处理;末次激发后24小时内取材,肺组织石蜡包埋切片后行HE染色观察病理变化;免疫组化和Westernblot方法测定各组肺组织瘦素及瘦素受体蛋白的表达情况;Realtime-PCR方法检测肺组织中的瘦素及瘦素受体mRNA的表达情况。  结果:  1、肺组织病理改变:诱喘7天组较3天组小鼠气道炎症反应明显,支气管壁周围有大量炎症细胞浸润,布地奈德干预组气道炎症明显减轻,正常对照组无上述病理改变。  2、免疫组化方法检测肺组织瘦素蛋白的表达:诱喘3天组较正常对照组表达明显增高(0.2433±0.0309vs0.1828±0.0134,P<0.05);诱喘7天组较3天组表达明显增高(0.3445±0.0395vs0.2433±0.0309,P<0.05);布地奈德干预组较诱喘7天组表达略降低(0.3308±0.0388vs0.3445±0.0395,P>0.05)。瘦素受体蛋白的表达:诱喘3天组较正常对照组表达明显降低(0.1847±0.0390vs0.2562±0.062,P<0.05);诱喘7天组较诱喘3天组表达略降低(0.1689±0.038vs0.1847±0.0390,P>0.05);布地奈德干预组较诱喘7天组表达明显增高(0.3143±0.0564vs0.1689±0.038,P<0.05)。  3、Westernblotting方法检测肺组织瘦素蛋白表达:诱喘3天组较正常对照组表达明显增高(0.516±0.044vs0.271±0.048,P<0.05);诱喘7天组较3天组表达明显增高(0.714±0.079vs0.516±0.044,P<0.05);布地奈德干预组较诱喘7天组表达略降低(0.706±0.051vs0.714±0.079,P>0.05)。瘦素受体蛋白表达:诱喘3天组较正常对照组表达明显降低(0.459±0.089vs0.564±0.072,P<0.05);诱喘7天组较3天组表达略降低(0.438±0.094vs0.459±0.089,P>0.05);布地奈德干预组较诱喘7天组表达明显增高(0.623±0.101vs0.438±0.094,P<0.05)。  4、肺组织瘦素mRNA的表达:诱喘3天组较正常对照组表达明显增高(1.346±0.261vs1.00±0.00,P<0.05);诱喘7天组较3天组表达明显增高(1.984±0.398vs1.346±0.261,P<0.05);布地奈德干预组较诱喘7天组表达略降低(1.852±0.425vs1.984±0.398,P>0.05)。瘦素受体mRNA的表达:诱喘3天组较正常对照组表达略降低(0.906±0.384vs1.00±0.00,P>0.05);诱喘7天组较3天组表达略降低(0.845±0.353vs0.906±0.384,P>0.05);布地奈德干预组较诱喘7天组表达略增高(0.897±0.512vs0.845±0.353,P>0.05)。  结论:  在哮喘小鼠肺组织中,瘦素呈高水平表达,瘦素受体呈低水平表达,并且哮喘程度越重,瘦素表达越高,而瘦素受体的表达越低,提示在哮喘小鼠肺组织中可能存在瘦素抵抗现象,瘦素及其受体可能参与哮喘的发病;布地奈德可以通过上调瘦素受体的表达改善瘦素抵抗。
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