【摘 要】
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目的探讨视网膜色素上皮细胞条件培养液诱导脂肪干细胞分化为视网膜色素上皮细胞的能力及诱导后细胞增殖与迁移的能力;探究miR-29a对视网膜干细胞增殖及分化的影响,以期为视
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目的探讨视网膜色素上皮细胞条件培养液诱导脂肪干细胞分化为视网膜色素上皮细胞的能力及诱导后细胞增殖与迁移的能力;探究miR-29a对视网膜干细胞增殖及分化的影响,以期为视网膜退行性疾病的细胞替代治疗提供移植细胞。方法1.qPCR、蛋白质免疫印迹及免疫细胞化学检测诱导后脂肪干细胞增殖及视网膜色素上皮细胞相关标记物表达情况。细胞迁移实验检测诱导后细胞迁移能力。2.在增殖条件下,通过qPCR、细胞免疫化学、蛋白质免疫印迹及CCK8实验检测miR-29a对视网膜干细胞增殖影响;在分化条件下,通过qPCR、细胞免疫化学、蛋白质免疫印迹检测miR-29a对视网膜干细胞分化潜能的影响。结果1.视网膜色素上皮细胞条件培养液能诱导脂肪干细胞表达视网膜色素上皮细胞标记物如RPE65、CK8及Bestrophin,诱导后细胞ki67及BrdU阳性表达率上调,迁移速率加快。2.转染miR-29a模拟物后,qPCR、细胞免疫化学、蛋白质免疫印迹检测结果表明视网膜干细胞分化相关标志物如β 3-tubulin、Rhodopsin、PKC-α、Brn3a、Calbindin、GFAP等表达上升,但抑制其增殖标记物ki67及视网膜前体细胞相关标志物如Pax6、nestin等的表达,转染miR-29a抑制剂后结果相反。结论1.视网膜色素上皮细胞条件培养液能诱导脂肪干细胞向视网膜色素上皮细胞分化并促进诱导后细胞的增殖与迁移。2.miR-29a能促进视网膜干细胞分化但抑制其增殖。
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