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喉癌(Larynal Carcinoma,LC)为耳鼻咽喉部常见的恶性肿瘤,其发病率在头颈部原发恶性肿瘤中排第二位,男性发病率约是女性的10倍,发病年龄多在50～70岁之间,组织学多为鳞状细胞癌,手术为其治疗的首选方法。一般认为喉癌的发生与吸烟和饮酒有关,但近年来病毒感染已被认为是继吸烟、饮酒之后该肿瘤的重要致病因子。与喉癌发病关系最为密切的病毒是人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV),但其致病机制不明。p53基因属抑癌基因,其编码蛋白主要生物学功能为通过引起细胞周期阻滞,促进细胞分化和诱导细胞凋亡,参与细胞生长的负调控。p53基因突变后编码蛋白上述功能丧失,却出现了促使细胞癌变的作用。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是细胞核内DNA合成所必需的多肽,参与细胞增殖周期正调控,细胞增殖时其表达上调。PCNA的表达程度是用于反映细胞增殖状况及肿瘤恶性程度的良好客观参照。喉癌的发生与抑癌基因p53突变及PCNA表达有何关系?HPV感染对抑癌基因p53突变和PCNA表达有何影响?它们在喉癌发病过程中究竟起什么作用?针对这些问题,综合分析HPV感染与喉癌发生的关系及其对抑癌基因p53及PCNA表达的影响,探讨HPV感染对喉癌的致病机制。目的:检测喉癌组织HPV感染、突变型P53蛋白及PCNA表达情况,探讨喉癌发生与HPV感染的关系及喉癌发病的病毒学分子生物机制,为喉癌预警、早期诊断、早期治疗和预后判断提供理论依据。方法:收集大连市2003年～2005年手术切除喉癌标本58例,均为鳞状细胞癌;所有病例提供者术前均未接受任何放疗与化疗。同时取癌旁组织5例,良性声带息肉5例用于对照。标本经常规石蜡包埋并制成普通组织切片,HE染色,光镜观察,确定病理诊断及取材部位。用DNA原位杂交法与免疫组织化学法确定细胞内HPV感染,用免疫组织化学法检测肿瘤细胞突变型P53蛋白和PCNA表达情况。分析喉癌的HPV感染率与突变型P53蛋白及PCNA表达的关系。应用SPSS11.0统计软件,以χ2检验对实验结果进行统计学分析,差异显著性标准为P<0.05。结果:1、HPV感染情况。⑴喉癌、癌旁组织和良性声带息肉,HPV感染率原位杂交法检测分别为39.66%(23/58)、40.00%(2/5)和0.00%(0/5);免疫组织化学法检测分别为36.21%(21/58)、40.00%(2/5)和0.00%(0/5);HPV感染率在喉癌及癌旁组织显著高于良性声带息肉( P<0.05),但喉癌与癌旁组织间差异不显著(P>0.05)。⑵喉癌HPV感染的原位杂交与免疫组织化学两种检测方法阳性率比较无显著性差异(P>0.05,χ2 =2.228,P=0.136)。2、突变型P53和PCNA蛋白表达情况。喉癌、癌旁组织和良性声带息肉,突变型P53蛋白阳性表达率分别为77.59%(45/58)、0.00%(0/5)和0.00%(0/5),喉癌显著高于癌旁(P<0.05)及良性声带息肉(P<0.05); PCNA阳性表达率分别为70.69%(41/58)、0.00%(0/5)和0.00%(0/5),喉癌显著高于癌旁(P<0.05)及良性声带息肉(P<0.05)。3、HPV感染、P53、PCNA表达与喉癌临床病理特点的相关性。通过原位杂交、免疫组织化学两种方法,检测喉癌HPV感染与喉癌生物学行为的相关性分析,均显示了相同的结果:HPV感染与喉癌发生部位、分期、分化程度、淋巴结转移及复发无相关关系,声门下型喉癌3例中两种检测方法HPV都为阴性表达;突变型P53蛋白的表达在无淋巴结转移组(77.21%,34/44)与淋巴结转移组(64.29%,9/14)之间差异显著(P<0.05),但其表达与喉癌发生部位、分期、分化程度及复发无相关关系;PCNA阳性表达在Ⅰ-Ⅱ期喉癌(60.00%,24/40)与Ⅲ-Ⅳ期喉癌(94.44%,17/18)之间差异显著(P<0.05),高分化喉鳞癌(60.53%,23/38)与中、低分化喉鳞癌(92.31%、12/13,85.71%、6/7)之间差异显著(P<0.05),无淋巴结转移(65.91%,29/44)与淋巴结转移(92.86%,13/14)间差异显著(P<0.05),无复发(66.00%,33/50)与复发(100 %,9/9)之间差异显著(P<0.05),但其表达与喉癌发生部位无相关关系。4、喉癌中HPV感染与P53、PCNA蛋白表达的关系。喉癌HPV感染(原位杂交方法)组与未感染组的突变型P53蛋白阳性表达率分别为100%(23/23)与62.86%(22/35),两者差异显著(P<0.05); PCNA阳性表达率分别为100%(23/23)与51.43%(18/35),两者差异显著(P<0.05)。结论:1. HPV感染是喉癌的诱发因素之一。2.喉癌发病可能与p53突变相关。3.喉癌细胞有PCNA蛋白表达上调。4. HPV促使p53基因突变及PCNA蛋白表达上调可能是喉癌的发病机制之一。5.联合检测HPV感染、突变型P53及PCNA蛋白表达情况有助于喉癌预警和诊断。