棉铃虫甾醇载体蛋白-2(HaSCP-2)在幼虫不同组织中的表达及其抑制剂生物活性测定

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胆固醇是昆虫细胞细胞膜的重要组成成分(占细胞膜组成的14%),也是合成蜕皮激素等某些激素的前体,对昆虫生理及其代谢过程具有重要作用。但是,由于昆虫体内缺少胆固醇合成途径中所必须的关键性的酶,因此不能从头合成,必需从食物中获得,这种生理限制显示胆固醇的吸收/转运对昆虫来说尤为重要。因此参与胆甾醇吸收/转运的固醇载体蛋白(sterol carrier protein-2,SCP-2)被认为是研制新型生物杀虫剂的有效靶标,已有研究显示蚊子SCP-2是研制新型杀蚊剂的一个有效靶标,并筛选出一些伊蚊SCP-2抑制剂(sterol carrier protein-2 inhibitors,SCPIs),对伊蚊有相当好的致死作用。此外,SCPIs也可以阻断烟草天蛾幼虫(Manduca sexta)(鳞翅目)对胆固醇的吸收,致其死亡。本实验就是以鳞翅目最重要的害虫棉铃虫(Helicoverpa armigera)为研究对象,对棉铃虫固醇载体蛋白(HaSCP-2)在不同组织不同龄期的差异表达及其抑制剂生物活性进行研究。首先我们采用RT-PCR技术,检测了HaSCP-2基因棉铃虫幼虫在不同组织中的转录,HaSCP-2 mRNA在被测试的所有组织中都能检测到,这表明HaSCP-2的表达在进食期没有组织特异性。为了检测HaSCP-2在不同组织中表达量的差别,本研究用实时荧光定量PCR技术对进食期的四龄(第一天和第二天)、五龄(第一天、第二天、第三天)棉铃虫幼虫的不同组织(脂肪体(fat body,FB);马氏管(Malpighian tube,Mt);后肠(hindgut,Hdg);中肠(midgut,Mdg;背部表皮(epidermis,Ep)和头部(Head)进行定量检测。结果表明在中肠样品中的HaSCP-2 mRNA水平最高,虽然其它组织中都可以检测到,但转录水平较低,证明鳞翅目幼虫中肠是吸收甾醇的主要部位。因此,HaSCP-2基因的空间转录谱与其在中肠中协助胆固醇的吸收的作用是一致的。为了研究SCPIs对HaSCP-2是否也有抑制作用,本实验从棉铃虫一龄第一天开始,用系列浓度梯度(0.1mM、1mM、10mM、25mM)的抑制剂(AeSCPI-2和SCPI-7)对其进行生物测定。结果发现SCPI-2使棉铃虫体重减轻,幼虫初期减轻比后期明显;极少量的发育进程很缓慢;有些在化蛹前变黑,不能化蛹;少量的不能羽化蛾或羽化受阻,蛹壳退不完全。这些结果显示抑制剂对棉铃虫的生长发育具有一定的影响。本实验为进一步弄清楚棉铃虫SCP-2基因分子结构奠定了基础;对揭示此基因对棉铃虫生长发育过程中所起的作用也具有重要的意义;为HaSCP-2抑制剂的鉴定奠定基础,HaSCP-2抑制剂的鉴定是研制新型昆虫生长调节剂的重要一步。
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