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‘红肉蜜柚’[Citrus maxima(Burm.)Merr.’Hongroumiyou’]为云香科柑橘属植物,是‘琯溪蜜柚’的芽变品种,在果实成熟后期和采后贮藏期间汁胞的粒化现象严重,极大地影响了其果实品质、经济价值。本研究探讨了‘红肉蜜柚’汁胞木质素合成相关MYBs的基因特征及其在柚汁胞木质素合成途径的转录调控作用,以期为研究汁胞粒化发生机制提供新的借鉴。主要研究结果如下:1、根据柚RNA-seq数据库筛选差异表达的MYBs基因,共获得86条基因序列,利用MEGA5.2构建系统进化树、参考甜橙全基因组分析以及拟南芥、甜橙序列比对分析,最终确定17条MYBs基因序列为所需序列,并从‘红肉蜜柚’中共克隆了 16条柚MYBs基因编码区序列,分别为 CmMYB58-2、CmMYB330、CmMYB85-1、CmMYB85-2、CmMYB20、CmMYB58-1、CmMYB61、CmMYB55、CmMYB86、CmMYB103、CmMYB46-1、CmMYB46-2、CmMYB77-1、CmMYB77-2、CmMYB52-1、CmMYB52-2。2、对所克隆得到的CmMYBs进行生物信息学分析预测显示,16个CmMYBs皆为不稳定、亲水性、非分泌蛋白,含有多个不同的激酶潜在的磷酸化位点,皆定位于细胞核,蛋白质二、三级结构分析以及结构域预测、氨基酸序列比对显示,α螺旋以及β转角的存在使CmMYBs形成相应的螺旋-转角-螺旋结构,除CmMYB58-1只含有1个MYB结构域,为1RMYB转录因子,其他CmMYBs皆含有2个MYB结构域,为典型的R2R3MYB转录因子。通过系统进化树分析发现,CmMYB58-2属于R2R3MYB第3亚组,CmMYB330属于第4亚组,CmMYB61、CmMYB 55、CmMYB86都属于第 13 亚组,CmMYB77-1、CmMYB 77-2属于第22亚组,CmMYB52-1、CmMYB52-2属于第21亚组,CmMYBs与相应的拟南芥、甜橙、毛果杨、火炬松等相关MYBs靠近。所获得的CmMYBs在功能上可能与进化树中靠近的物种相似,参与调控木质素代谢基因。3、利用荧光定量PCR对CmMYBs进行表达分析,结果表明,CmMYBs在柚汁胞发育过程中的表达量呈现不同的变化趋势。CmMYB46-1的表达量在整个汁胞发育时期大部分处于极低(小于0.1)水平,CmMYB55在花后161 d的近中柱和远中柱部位的表达量达到最高,CmMYB 77-1、CmMYB77-2在花后208 d的近中柱和远中柱部位的表达量都达到最低;CmMYB58-2、CmMYB330、CmMYB85-1、CmMYB85-2、CmMYB20、CmMYB61、CmMYB86、CmMYB103、CmMYB46-2、CmMYB52-1、CmMYB52-2在果实近中柱部位的汁胞发育过程中的表达量随柚粒化程度的加重,总体呈上升趋势,但是在汁胞发育的后期,表达量下降。根据上述CmMYBs在汁胞发育过程中的表达规律,本研究认为CmMYB58-2等基因可能参与汁胞粒化进程。4、CmMYBs的亚细胞定位分析结果表明,CmMYB330、CmMYB85-1、CmMYB85-2、CmMYB20、CmMYB58-1、CmMYB61、CmMYB55、CmMYB86、CmMYB103、CmMYB46-1、CmMYB46-2、CmMYB52-1、CmMYB52-2 为核定位蛋白。CmMYBs的转录激活活性分析结果表明,CmMYB330、CmMYB46-2在Y2H Gold酵母中没有转录激活活性,CmMYB58-2、CmMYB85-1、CmMYB85-2、CmMYB20、CmMYB58-1、CmMYB61、CmMYB55、CmMYB86、CmMYB103、CmMYB46-1、CmMYB52-1、CmMYB52-2在Y2H Gold酵母中都有转录激活活性且CmMYB20、CmMYB55、CmMYB86起到转录激活活性的区域分别在它们的C端。5、参考已克隆的柚木质素合成相关基因序列和甜橙基因组序列,克隆到了柚木质素合成相关基因5’端调控序列,分别是proCmC4H、pro Cm4CL、proCmC3H、proCmCCoAoMT1、proCmCAD1、proCmF5H、proCmCOMT1。对所获得的5’端调控序列进行分析表明,这些序列皆被预测含有多个不同类型的MYB结合位点元件,如AC-Ⅰ、AC-Ⅱ、MBS、MBSI、MRE等,它们同样也含有多个不同类型的激素响应元件,如乙烯、生长素、水杨酸、赤霉素、茉莉酸甲酯等响应元件。6、利用点对点酵母单杂系统对CmC4H、Cm4CL、CmC3H、CmCCoAoMT1、CmCAD1、CmF5H、CmCOMT1 的5’端调控序列分别与 CmMYB58-2、CmMYB330、CmMYB85-1、CmMYB85-2、CmMYB20、CmMYB58-1、CmMYB61、CmMYB55、CmMYB103、CmMYB46-2、CmMYB52-1、CmMYB52-2的互作关系进行研究,结果表明,无法确定CmC4H、CmCCoAoMT1、CmCOMT1的5’端调控序列的诱饵酵母菌株的AbA抗性最低浓度,仅对Cm4CL、CmC3H、CmCAD1、CmF5H的5’端调控序列进行后续的酵母单杂分析,最终,本研究确定了 CmMYB58-2能结合CmC3H的5’端调控序列,参与转录调控柚汁胞木质素合成。