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目的:皮肤中黑素含量是决定皮肤颜色的主要因素之一。黑素细胞产生黑素,并将其输送到周围的角质形成细胞,从而影响皮肤的颜色。黑素细胞生成黑素的不足可以导致皮肤色素减退或脱失,促进黑素细胞的黑素生成是治疗色素脱失性疾病的策略之一。酪氨酸酶是黑素细胞产生黑素的关键酶。近年研究发现,酪氨酸酶主要受小眼畸形相关转录因子(MITF)的调控,而MITF的表达又受到上游蛋白如cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的影响。中药人参曾被用于白癜风等脱色素性疾病的治疗,而Rbl是中药人参的主要有效成分之一。近年来有报道人参皂甙Rb1具有抗健忘、抗衰老、抗氧化、抗凋亡,促进神经纤维形成并保持其功能、等多重作用。黑素细胞和神经细胞在胚胎发生中同源,但人参皂甙Rb1对黑素细胞黑素生成的作用尚未见报道。本文研究人参皂甙Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制,以探讨其用于治疗色素脱失性皮肤病的前景。
方法:将黑素细胞进行原代培养、传代,选取第2-5代黑素细胞进行实验,采用MTT法测定细胞增殖情况,氧化多巴法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素生成,免疫蛋白印记法测定酪氨酸酶和小眼畸形相关转录因子(MITF)的表达及cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的激活。
结果:加入25-100μg人参皂甙Rb1作用72h后,黑素细胞活力无明显影响,细胞酪氨酸酶活性和黑素含量呈浓度依赖性增强;100μM人参皂甙Rb1作用72h后,酪氨酸酶、MITF蛋白表达明显增加,CREB明显激活。10μM的蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制人参皂甙Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,进而抑制人参皂甙Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。
结论:人参皂甙Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路参与了人参皂甙Rb1的促黑素生成机制。