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背景及目的:慢加急性肝衰竭(Acute-on-chronic liver failure,ACLF)的动物模型需建立在慢性肝病(Chronic liver disease,CLD)的基础之上[1,2]。酒精性肝硬化是世界范围内常见的肝病,本研究致力于模拟临床慢性酒精性肝硬化的自然病程,建立慢性酒精性肝病(ALD)的小鼠动物模型,为ACLF小鼠模型的建立提供基础。方法:Liber-De Carli液态酒精饲料自由摄食,喂养12周,合并每周一次的31.5%酒精灌胃,建立慢性酒精性肝病小鼠模型(ALD组)。建模过程中密切观察小鼠行为改变,造模结束后取小鼠外周血血清进行AST、ALT检测,CBA法检测外周血IL-6、IL-10、TNFa等炎症相关因子水平,肝组织行HE染色、天狼猩红染色、油红O染色等观察病理变化,MPO、CYP2E1免疫组化染色及脾脏Treg细胞流式检测进一步观察ALD小鼠模型中的病理改变。结果:ALD组小鼠在建模过程中表现为摄食减少、营养不良、活动减少、脱毛、反应迟钝等亚健康状态,皮毛光泽度差,8周起部分小鼠出现躁狂、易怒等精神状态的改变。ALD组小鼠4周时肝组织油红O染色显示大范围脂肪变性,8周时天狼猩红染色可观察到轻微纤维化,HE示炎症细胞浸润,在建模终期12周时可观察到超过半数的疾病模型组小鼠肝脏内出现明显的纤维沉积及炎细胞团散布,血清AST、ALT升高,肝内MPO免疫组化示ALD模型组髓系细胞浸润增多,肝内CYP2E1免疫组化示ALD组酒精导致的肝损伤显著,脾脏淋巴细胞流式检测显示模型组小鼠脾脏Treg细胞比例下降。结论:为期12周的Liber-De Carli液态酒精饲料喂养合并每周一次酒精灌胃的方法可模拟临床慢性酒精性肝病自然病程,建立简单易行、效果明显的小鼠慢性酒精性肝病模型。背景及目的:酒精性肝硬化基础上的慢加急性肝衰竭(Acute-on-chronic liver failure,ACLF)是世界范围内常见的ACLF类型[3,4],但目前仍缺乏完全模拟ACLF自然病程的小鼠疾病模型。本部分研究在前期慢性酒精性肝病小鼠模型的基础上给予急性感染打击作为诱因,致力于建立以感染为诱因的小鼠酒精型ACLF动物模型。方法:在前期Liber-De Carli饲料喂养加灌胃的慢性酒精性肝病模型基础上,给予腹腔内大肠杆菌注射,模拟急性腹膜炎,建立慢加急性肝衰竭的小鼠模型。建模后取小鼠外周血血清进行AST、ALT检测,CBA法检测外周血IL-6、IL-10、TNFa等炎症相关因子水平,肝组织行HE染色、MPO免疫组化染色观察动物模型病理改变。观察益赛普TNFa阻断剂对ACLF模型生存率的影响。结果:ACLF组小鼠感染后血清AST、ALT升高较control感染组明显升高,IL-6、TNFa明显增多,MCP-1单核细胞激活因子上调,肝组织中性粒细胞及单核/巨噬细胞系增多,发生明显的全身性炎症反应,有时肾脏也受到累及(肾积水2/8)。TNFa被益赛普阻断后,ACLF组小鼠与control组小鼠生存率均明显提高,但ACLF组生存率改善更加明显。结论:在ALD小鼠模型基础上腹腔注射大肠杆菌可模拟临床ACLF自然病程,感染后的ALD小鼠与control感染组对比,可观察到更严重的系统性炎症反应与肝损伤,与临床以感染为诱因的酒精性肝硬化患者特征相符,可作为探索ACLF病生机制的良好小鼠疾病模型。TNFa是此ACLF模型中发挥作用的重要因子之一。背景及目的:转录组测序及分析已经成为研究病理生理机制及发现新的关键分子的重要前沿手段。在前期ACLF小鼠模型的基础上,对建模过程中的小鼠肝脏全转录组RNA进行测序分析,尤其关注TNFa相关通路在ACLF疾病模型中的改变。方法:对正常小鼠、酒精喂养2w、酒精喂养12w、急性感染后1h的酒肝小鼠、急性感染后1h的正常小鼠分别从肝脏组织中抽提全RNA并进行全转录组测序。针对转录测序数据及TNF相关的TNF signal pathway及Toll-like receptor pathway的差异基因进行分析。结果:Toll-like receptor通路在小鼠慢性酒精性喂养初期略有变化,但在整个慢性阶段变化不明显。急性感染后,该通路明显激活,N1h与E1h共同上调的下游因子包括TNFa、IL6、IL1β、CD40等。在酒精性喂养小鼠2周时,TNF信号通路主要表现apoptosis功能中少量基因下调,如CREB、CCL2、IL1β等。而12周时,该通路聚集的差异基因仍为少数,但由下调变为上调,其中上调的基因为TNFR1、MKK3、CXCL10和CCL5。在Acute phase阶段,N1h组与E1h组小鼠该通路均主要表达为上调,下游CCL2、CXCL10、IL1b、Fos等影响机体炎症反应、白细胞激活的蛋白显著上升,cell survival通路上的主要因子也被激活。但在整体TNF通路下游表达因子明显增加的同时,Normal组小鼠感染后还表现出负向平衡调节的能力,如necroptosis通路中RIPK3、MLKL、Drp1明显下调,apoptosis中的casp2/3明显下调,经典MAPK通路中的一些中间环节因子亦表达下调。结论:感染诱导的酒精性ACLF小鼠负向平衡调节能力受损,坏死性凋亡下调机制失活。背景及目的:若干研究表明,既往失代偿病史是ACLF发生及发展的重要影响因素,代偿性肝硬化与失代偿肝硬化发展而来的ACLF在临床特点及疾病严重程度上有所不同[5-8],本部分只旨在HBV相关肝硬化患者中分析、验证既往失代偿病史对ACLF的发病、临床特征及结局转归影响。方法:从2005-2010年仁济医院的肝硬化住院患者筛选入组中890例因肝功能急性失代偿入院、以HBV为主要病因患者,根据既往有无失代偿病史将队列分为首次失代偿的代偿性肝硬化患者组(FD组)400例与失代偿肝硬化患者组(PD组)490例,统计、分析两组间的临床表现及转归差异,并进一步分析两组中ACLF患者的异同。结果:FD组患者AST、ALT、TB、WBC水平明显高于PD组,ACLF发生率亦高于PD组(39.2%vs 29.2%,p=0.002),但两组在ACLF等级即ACLF严重程度上却无明显统计学差异。两组ACLF患者的短期及长期死亡率均无明显统计学差异。结论:既往无失代偿病史的代偿性肝硬化患者在发生首次急性失代偿后ACLF发生比例较高,但既往失代偿病史对患者的短期及中长期结局转归无明显影响。