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牙髓组织中存在具有自我更新和多向分化潜力的牙髓干细胞。在牙齿生长发育与组织修复过程中，一些生长因子发挥着重要作用。这些生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor,bFGF）、转化生长因子-[3(Transforminggrowthfactorβ，TGF-β)、骨形成蛋白(Bonemorphogenesisproteins，BMPs)、胰岛素样生长因子(insulingrowthfactors，IGFs)等。目前研究认为，在这些生长因子中，bFGF在牙髓组织创伤修复中发挥重要作用。然而，bFGF在牙髓组织创伤后修复的确切作用机制尚不清楚。
目的：
通过研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)对体外培养人牙髓细胞的增殖、迁移能力的影响及碱性磷酸酶(ALPase)活性变化，明确bFGF在牙髓牙本质复合体修复中的可能作用机理，为预防和治疗牙髓疾病提供一定的理论基础。
方法：
1．牙髓细胞的培养和鉴定：取因正畸或阻生拔除的健康牙齿，采用改良组织块培养法体外获得原代人牙髓细胞并常规传代；取第4代牙髓细胞行抗波形蛋白、角蛋白单克隆抗体染色。取第5～8代牙髓细胞进行实验。
2．牙髓细胞增殖活性检测：采用CellCountingKit-8(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖活性。为研究bFGF对牙髓细胞增殖的浓度效应，取对数生长期的细胞，按以下分组：空白对照组，0.5ug/L、1.0ug/L、5.0ug/L、10.0ug/L、50.0ug/LbFGF组，分别在培养48h后用酶联免疫检测仪在450nm波长测定各组每孔光吸收值(A)。为研究bFGF对牙髓细胞增殖的时间效应，将bFGF终浓度调为1.0ug/L，分别于培养后1d、3d、5d和7d检测其光密度值(OD)。以空白对照组的OD值为100％细胞率，各组增值率=实验组OD值均值/空白对照OD值均值×100％，计算细胞相对增值率。
3．牙髓细胞迁移活性检测：采用Transwell小室法检测细胞迁移能力。为研究bFGF对牙髓细胞迁移的浓度效应，按以下分组：空白对照组，0.5ug/L、1.0ug/L、5.0ug/L、10.0ug/L、50.0ug/LbFGF组，分别在培养24h后计算各组迁移到小室滤膜外表面的细胞数。为研究bFGF对牙髓细胞增殖的时间效应，采用bFGF终浓度为1.0ug/L，分别于培养后第6d、12d、18d、24d和30h取出Transwell小室并计数。
4．牙髓细胞ALP活性检测：将细胞接种于4块96孔板中，待细胞出现汇合生长后，更换含bFGF终浓度为10.0ug/L的培养液，在继续培养的第7d、14d、和21d检测各组的ALP活性。
结果：
1．改良组织块培养法解决了组织块贴壁难的问题，提高了牙髓细胞的培养效率。体外培养的牙髓细胞多为典型的梭形结构，胞体丰满，胞浆均匀，核圆形或卵圆形。牙髓细胞抗波形蛋白染色阳性，抗角蛋白染色阴性，证实牙髓细胞来源于间叶组织，符合牙髓组织学特征。
2．bFGF在1.0～50.0ug/L浓度下可促进体外培养人牙髓细胞的增殖(P＜0.05)，bFGF促进牙髓细胞增殖的最低显效浓度为1.0ug/L，最佳显效浓度为10.0ug/L。从第1d起，bFGF可诱导体外培养人牙髓细胞增殖(P＜0.05)，bFGF诱导牙髓细胞增殖在第3d即可达到高峰(P＜0.01）。
3．与对照组相比，bFGF在1.0～50.0ug/L浓度下诱导细胞迁移(P＜0.05)，bFGF最低显效浓度为1.0ug/L，10.0ug/L的bFGF促进迁移作用最强，组间比较显示10.0ug/L组与1.0ug/L、5.0ug/L组有显著性差异(P＜0.01)，但与50.0ug/L组无显著性差异(P＞0.05)。从12h起，bFGF可诱导牙髓细胞迁移（P＜0.05），组间比较显示24h组与6h、12h、18h组差异显著(P＜0.05)，与30h组间比较无显著性差异(P＞0.05)。
4．与对照组相比较，bFGF抑制牙髓细胞的ALP活性(P＜0.05)，经bFGF预处理过的牙髓细胞，当撤去bFGF后，牙髓细胞的ALP活性反而增高(P＜0.05)。
结论：
改良组织块法可成功培养出人牙髓细胞。bFGF对体外培养牙髓细胞的增殖、迁移和碱性磷酸酶活性具有一定的调控作用，在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用。本实验为研究bFGF对牙髓细胞分化调控机制提供实验依据，为临床牙髓牙本质复合体损伤后修复的临床治疗策略提出新的思路。