【摘 要】
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脂蛋白脂肪酶（Lipoprotein lipase,LPL,EC 3.1.1.34）是血浆脂质代谢的关键酶,其主要生理功能是水解乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的甘油三酯为甘油和游离脂肪酸供组织利用。LPL结构和功能的改变可导致以血浆甘油三酯升高为主要特征的异常脂蛋白血症。而载脂蛋白CⅡ（ApolipoproteinCⅡ,ApoC Ⅱ）作为LPL的必需激活因子,在脂质代谢过程同样发挥重要的作用。ApoC
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脂蛋白脂肪酶（Lipoprotein lipase,LPL,EC 3.1.1.34）是血浆脂质代谢的关键酶,其主要生理功能是水解乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的甘油三酯为甘油和游离脂肪酸供组织利用。LPL结构和功能的改变可导致以血浆甘油三酯升高为主要特征的异常脂蛋白血症。而载脂蛋白CⅡ（ApolipoproteinCⅡ,ApoC Ⅱ）作为LPL的必需激活因子,在脂质代谢过程同样发挥重要的作用。ApoC Ⅱ结构和功能的异常可能导致LPL活性降低,引起脂蛋白代谢紊乱。向ApoC Ⅱ缺乏症的患者输入正常的血浆或分离的ApoC Ⅱ可作为治疗高甘油三酯血症的措施。 本实验被分成两部分进行。第一部分为:利用聚合酶链反应-单链构象多态性（polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）分析技术对203例样本LPL基因外显子2、3（包括内含子-外显子交界区）进行了突变的筛查,以探讨中国人群LPL基因突变常见的种类、频率以及其可能产生的影响。在203例样本中检出1例发生在外显子3扩增区域的可疑突变,通过PCR产物直接测序,证实为外显子3 C~562→T转换突变杂合子,由此突变导致Leu~103→Leu同义表达。该突变目前国内外均未见报道,在GenBank上注册,获得注册号DQ083390。未检出其他突变。 第二部分为:人载脂蛋白CⅡ（human ApoCⅡ,简称为hApoCⅡ）成熟肽编码基因的克隆和表达。利用TKM法自人血细胞中提取基因组DNA,以人基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应分别扩增ApoC Ⅱ成熟肽的编码基因外显子3和外显子4,继而采用外显子拼接技术,以两种扩增产物为模板再次进行PCR,得到246 bp的人ApoC Ⅱ成熟肽基因编码片段。将人ApoCⅡ成熟肽基因编码片段与克隆载体pUC18通过平、粘末端连接获得重组克隆质粒pUC18/human-ApoCⅡ（简称为pUC18/hApoCⅡ）,经测序证实重组入克
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