【摘 要】
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茭白是禾本科多年生宿根草本植物。由于茭白大规模种植,在许多产区都出现了茭白胡麻叶斑病,该病主要危害茭白叶片,导致茭白植株早衰枯死,造成减产和品质降低。茭白胡麻叶斑病是由稻平脐孺孢(Bipolaris oryzae)引起真菌病害。目前对茭白胡麻叶斑病的防治主要是农业防治和化学防治,考虑到环境污染和食品安全等问题,生物防治方法日益受到人们的关注。茭白胡麻叶斑病菌在人工培养条件下不容易产生分生孢子,对该
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茭白是禾本科多年生宿根草本植物。由于茭白大规模种植,在许多产区都出现了茭白胡麻叶斑病,该病主要危害茭白叶片,导致茭白植株早衰枯死,造成减产和品质降低。茭白胡麻叶斑病是由稻平脐孺孢(Bipolaris oryzae)引起真菌病害。目前对茭白胡麻叶斑病的防治主要是农业防治和化学防治,考虑到环境污染和食品安全等问题,生物防治方法日益受到人们的关注。茭白胡麻叶斑病菌在人工培养条件下不容易产生分生孢子,对该菌的鉴定以及脱毒造成一定阻碍。对该菌生物学特性、产孢条件等进行了研究,旨在为茭白胡麻叶斑病菌的鉴定及获得脱毒菌株奠定理论基础。真菌病毒是指可以在丝状真菌、酵母菌和卵菌中侵染、复制和繁殖的一类病毒,广泛存在于真菌和卵菌的主要类群中。真菌病毒主要包括ds RNA病毒、+ss RNA病毒、-ss RNA病毒、ss DNA病毒、RNA-RT病毒。稻平脐孺孢所含真菌病研究旨在寻找与弱毒相关的真菌病毒,应用在茭白胡麻叶斑病生物防治方面。自然界中依赖于分生孢子的垂直传播方式传毒率很低,用分生孢子法可以把某些真菌病毒从寄主中脱除。但稻平脐孺孢体外培养不产生或者产生极少量分生孢子,本文从培养基、温度、光照、菌丝损伤等外界条件对茭白胡麻斑病病菌生长速度、菌落形态、分生孢子产生量的影响进行研究。确立了茭白胡麻斑病病菌最佳产孢条件,即茭白秆汁琼脂培养基、25℃、12 h光照/12 h黑暗交替、菌丝损伤、培养10 d。通过对43个茭白胡麻叶斑病菌株的ds RNA检测表明,约46.5%的菌株含有ds RNA,在茭白胡麻叶斑病菌中,ds RNA的存在具有一定的普遍性。此外,提取所有菌株总RNA,利用高通量技术进行测序,检测到28种病毒。包括ds RNA病毒、+ss RNA病毒、-ss RNA病毒、未分类的RNA病毒和一些未分类的病毒。RT-PCR结果显示,每个菌株至少含有2种病毒。可见茭白胡麻叶斑病菌所携带的真菌病毒具有一定的多样性,携带真菌病毒的弱毒菌株具有潜在的生物防治作用。因此对茭白胡麻叶斑病菌双分病毒Bipolaris oryzae partitivirus 1(Bo PV1)进行了全长克隆及系统进化分析。首先通过高通量测序获得病毒Bo PV1的部分c DNA序列,然后用RACE方法获得Bo PV1基因组的S1-ds RNA和S2-ds RNA片段的全长c DNA序列。ds RNA1片段全长含有2322个核苷酸,包含一个ORF,编码病毒的Rd Rp。ds RNA2片段c DNA全长含有2328个核苷酸,包含一个ORF,编码病毒的Cp蛋白。基于病毒Rd Rp结构域和Cp蛋白序列进行多重比对和聚类分析,表明Bo PV1隶属于Betapartitivirus。
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