甘薯茎线虫诱导cDNA文库的构建与ESTs分析

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cododo2009
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为了研究甘薯受茎线虫侵染的分子和细胞机制并发掘与甘薯抗茎线虫病相关的基因,本研究从北京市大兴区收获的病薯上分离得到甘薯茎线虫,经过纯化并进行表面消毒,用打孔接种茎线虫的方法,从高抗茎线虫病品种鲁薯3号、潮薯1号、济114、济宁10号以及皖薯 1 号等11 个甘薯品种中,筛选得到抗茎线虫病扩展的品种鲁薯3号、皖薯1号和潮薯1号。 以鲁薯3号为材料,利用抑制差减杂交 (SSH) 的方法,构建了一个含有3024个克隆的正向差减文库。对3024个克隆进行菌液PCR扩增,从中筛选出1379个阳性克隆,然后进行测序,对测序成功的 ESTs 进行 Cluster 和 Blast 分析,共得到 185 个 unique ESTs,其中包括88个singletons和97个contigs。所有的unique ESTS在GenBank上进行Blast分析表明,149个ESTs推断编码的蛋白质与已知或推测的蛋白质氨基酸序列的相似性很高,其中72个ESTs与已知的甘薯ESTs有很高的同源性;36个ESTs在GenBank中搜索不到同源基因,可能代表新基因。经“Virluai”Northern blot分析表明,185个unique ESTs中94个是差异表达基因。根据G0功能分类方法,用Blast2go软件对94个差异表达基因在细胞组分、生物学过程、分子功能三个方面进行分类,结果得到含有与植物抗线虫基因蛋白酶抑制剂活性、抗线虫基因保守区域丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性相关的EST,具有几丁质酶、B-1,3-葡聚糖水解酶、过氧化物酶活性的植物病程蛋白,植物产生过敏反应后的细胞程序化死亡,对生物和非生物刺激产生反应和转录因子等相关的EST。
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