乳制品是以生鲜羊乳或者牛乳作为原材料,工业加工制备出的各种食品,因其风味独特、营养丰富,在人们的饮食结构中占有重要地位。但乳制品也非常容易受到微生物的污染,活的沙门菌等食源性致病菌是污染乳制品造成人体食物中毒的主要原因,一旦人体摄入含有此类活菌的乳制品极有可能对生命健康产生极其严重的危害。对于此类活菌,传统的检测方法具有操作繁琐,成本高及耗时长等缺点,因此,建立快速有效的检测方法用于检测乳制品中活的食源性致病菌具有非常重要的意义。本研究采用改良后的叠氮溴化丙锭(Improved propidium monoazide)对待测样品进行预处理,排除死菌对活菌检测的干扰,同时结合重组酶介导的等温核酸扩增技术(Recombinase aided amplification),实现了对牛奶中活的沙门菌和金黄色葡萄球菌的快速、灵敏检测。为了能进一步实现对实际样本的快速检测,本研究在传统微生物实验室基础上进行了一定程度的改造,增加了RAA快速检测法等多种检测系统,为能进行快速筛选实验或进行确证实验提供硬件基础。本文各章节内容分述如下:第一章综述了常见致病性微生物的检测手段及其研究进展,以期为乳制品中食源性致病菌的检测提供参考。第二章研究建立了PMAxx-RAA方法检测牛奶中的沙门菌。实验结果表明:4株目的菌株具有荧光扩增信号曲线,另外其他24株非目的菌株没有荧光扩增信号曲线,该方法有较好的特异性;对PMAxx效果进行了验证,显示PMAxx对死细胞膜具有渗透性,能消除死菌DNA对后续RAA的检测影响;该方法在纯培养液中沙门菌的检测限为2.8×10~3CFU/m L;在加标牛奶样品中,检测限为1.8×10~3CFU/m L,检测时间为40 min;本研究建立的PMAxx-RAA方法实现了牛奶中活的沙门菌的快速检测。第三章研究建立了PMAxx-RAA方法检测牛奶中的金黄色葡萄球菌。实验结果表明:针对金黄色葡萄球菌的nuc基因设计的引物有较好的特异性;对PMAxx效果进行了验证,确定在最佳PMAxx浓度(20μM)下,纯培养液中金黄色葡萄球菌的检测限为7.4×10~4CFU/Ml;在加标牛奶样品中,富集3 h和6 h后对应的检测限分别为5.4×10~2CFU/m L和5.4×10~1CFU/m L,检测时间为20min;本研究建立的PMAxx-RAA方法为准确、快速检测牛奶中活的金黄色葡萄球菌提供了一种全新策略。第四章初步完成了一种食品微生物实验室设计方案。本章节设计的食品微生物实验室整合了传统培养法和RAA快速检测法等多种检测系统,具有能够进行快速筛选实验或进行确证实验的硬件基础,能有效的缩短检验时间,提高检测效率。本设计重点对食品微生物实验室平面布局、分区和功能、结构与装修、实验室设备基本配置等进行论述,最终能实现样品处理、微生物培养、分离鉴定、分子生物学检测等一系列功能,为微生物检测提供基础和保障。