樟芝发酵液香气成分及生物活性物质研究

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樟芝是只生长在珍稀树种-牛樟树上的珍稀食、药用真菌,主要分布在中国台湾山区。其营养成分丰富,含有多糖、三萜类、固醇类及抗氧化物质等多种生理活性成分,具有保肝、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、解毒、抗炎等多种功效,近年来已成为研究和开发的热点。由于牛樟树被列为珍稀保护树种,而樟芝的固体培养周期也比较长,故樟芝的深层发酵技术越来越为人们所重视。研究发现,樟芝的挥发性物质在医药、食品、香料工业等方面具有很大的开发利用价值。本论文对樟芝深层培养发酵液中的香气成分进行分析研究,针对花香型(2-苯乙醇)的发酵条件进行优化;并对樟芝发酵液中的小分子物质的抗肿瘤活性组分进行了分离纯化。论文的主要内容如下:1、采用4种不同的常规萃取剂以及SPME(固相微萃取)对樟芝发酵液中的非极性香气成分进行萃取,然后用GC-MS进行了香气成分的分析鉴定。结果发现,正戊烷:二氯甲烷=2:1(V/V)为萃取剂时,香气种类最多,有51种,因两种溶液成本较低且容易获得,确定为樟芝发酵液的萃取剂。并对不同碳、氮源获得发酵液的挥发性物质进行比较和分析,发现樟芝发酵液中的主要香气成分,分别为醇类、醛类、杂环类、酯类和酮类等,同时还含有少量的酸类成分。2、以发酵液中的主体香气成分之一 2-苯乙醇的含量为指标,对发酵条件进行了优化,确定培养基和发酵条件为:50g/L葡萄糖,5g/L酵母粉,0.5g/L硫酸镁,lg/L的磷酸氢二钾,VB1JOOmg/L,pH为5,接种量为20%,装液量为120mL/250mL三角瓶,转速为150r/min,26℃恒温培养7d,樟芝发酵液中的2-苯乙醇含量达到1.236g/L。3、分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等对樟芝发酵液进行萃取,对四个萃取相提取物的体外生物活性进行了研究,细胞实验显示樟芝发酵液提取物具有体外抗肿瘤、免疫调节、抗衰老以及抗氧化等的生物活性,其中抗肿瘤活性最为显著。4、综合几种萃取相的生物活性以及萃取物的总量,首先对抗肿瘤活性较强的氯仿相和乙酸乙酯相采用硅胶吸附色谱法进行初步分离,由氯仿相获得得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ,由乙酸乙酯相获得了组分Ⅲ和组分Ⅳ。实验对化合物Ⅰ采用1H-NMR,13CNMR以及质谱等现代光谱技术,进行了结构鉴定,确定化合物Ⅰ为5-羟甲基呋喃甲醛。
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