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目的:目前为止,很多种肿瘤预防疫苗的功能是用来预防病毒感染而不是预防肿瘤本身,但严格意义上讲,癌症疫苗是能够直接对癌症进行免疫治疗的。在前期研究中,我们使用ALDEFLUOR+/ALDHhigh作为肿瘤干细胞标志,诱导生成DC疫苗,该方法能够在小鼠体内产生明显的抗肿瘤反应。ALDEFLUOR+/ALDHhigh作为抗原来源较未分离的肿瘤细胞或者ALDEFLUOR-/ALDHlow肿瘤细胞更加能够诱导出抗肿瘤反应。本课题研究旨在明确头颈部鳞癌细胞ALDEFLUOR+/ALDHhigh细胞具有一定的抗原性,将此标志阳性的肿瘤干细胞作为抗原负载DC细胞后,能够诱导本身T细胞及B细胞较其他组别产生更强的抗肿瘤干细胞细胞免疫和体液免疫。方法:1.获取患者外周血单个核细胞,利用免疫磁珠分选技术分离T细胞、B细胞及CD3-/CD19-单个核细胞。刺激活化T细胞及B细胞,并将CD3-/CD19-单个核细胞培养成为DC细胞2.将患者肿瘤细胞传代,并将细胞进行ALDH染色。将细胞通过流式细胞仪,进行肿瘤细胞的ALDH表达情况的检测,分选得到ALDHhigh肿瘤干细胞,及同等比例的ALDHlow非肿瘤干细胞。将肿瘤细胞进行反复冻溶制成细胞裂解液,并同DC细胞共同培养,获得负载不同抗原成分的DC细胞。3.将负载不同抗原成分的DC细胞致敏T细胞及B细胞再次同ALDHhigh肿瘤干细胞/ALDHlow非肿瘤干细胞反应,检测T细胞的杀伤能力,使用ELISA方法检测细胞因子及抗体的生成情况,并检测抗体的特异性。结果:1.ELISA结果显示,致敏后的T细胞、B细胞再次针对ALDEFLUOR+/ALDHhigh反应时,负载ALDEFLUOR+/ALDHhigh肿瘤细胞抗原的DC细胞致敏过的T细胞、B细胞能够产生更多的细胞因子IFN-γ、GM-CSF及细胞抗体Ig M、Ig G。2.杀伤实验结果证明,负载ALDEFLUOR+/ALDHhigh肿瘤细胞抗原的DC细胞致敏过的T细胞能过杀伤最多的ALDEFLUOR+/ALDHhigh肿瘤细胞。3.流式结果证明,负载ALDEFLUOR+/ALDHhigh肿瘤细胞抗原的DC细胞致敏过的B细胞所产生的抗体Ig G,在Binding实验中显示出针对 ALDEFLUOR+/ALDHhigh肿瘤细胞具有更强的结合力。HLA-ABC在ALDEFLUOR+/ALDHhigh肿瘤细胞中的表达下降。结论1.自头颈部肿瘤患者外周血中提取的肿瘤干细胞能够用来生成DC细胞,并使用患者的肿瘤细胞培养成细胞系后,分选的ALDHhigh肿瘤干细胞和ALDHlow非肿瘤干细胞可以成为抗原成分,负载于DC细胞。HLA-ABC在ALDEFLUOR+/ALDHhigh肿瘤细胞中的表达下降,提示为肿瘤干细胞免疫逃逸机制相关。2.人头颈部鳞癌ALDHhighCSCs负载后的DC诱导T细胞产生特异性抗CSCs细胞反应。3.人头颈部鳞癌ALDHhigh CSCs负载后的DC诱导T细胞产生特异性抗CSCs细胞反应。Binding实验证明Ig G对肿瘤干细胞有更强的针对性,表明肿瘤干细胞具有一定的抗原特异性。