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烟草野火病(Pseudomonas syringae pv.tabaci)和角斑病(Pseudomonas syringae pv.angulata)是侵染烟草的两种主要细菌性病害。为了指导烟农快速、准确识别和有效的病害防治,对烟草野火和角斑病进行了鉴定方法研究。1.烟草野火病、角斑病分子鉴定方法的建立根据NCBI的烟草野火和角斑病菌相关基因序列设计引物,经PCR产物测序序列对比找到病原菌差异序列,再设计PCR鉴定引物,筛选获得野火病和角斑病菌特异性PCR鉴定引物各1对,建立了烟草野火病和角斑病的分子鉴定方法。2.烟草野火病、角斑病分子鉴定方法的验证利用特异PCR引物对采集分离的16个疑似野火病菌和16个疑似角斑病菌以及番茄田表土和池塘水分离微生物、大豆叶际和根际微生物进行PCR鉴定,结果表明PCR鉴定为阳性的8个野火病菌和7个角斑病菌接种后产生相应症状,且PCR扩增结果与接种致病性相一致,证实该分子鉴定方法有效、可靠。3.烟草野火病、角斑病快速检测方法的建立通过对病斑研磨液直接进行菌体PCR扩增,并设计多重PCR体系进行优化,建立了可同时检测烟草野火病、角斑病病原菌的快速鉴定方法。4.建立PCR技术进行烟草野火病、角斑病病原菌纯化方法利用野火病、角斑病特异PCR鉴定引物(Ta BB1F/Ta BB1R,2F2/2R2)对分离的细菌菌落进行多代筛选鉴定,最终保证病原细菌中不含杂菌,对于抗病育种和相关技术研究具有重要意义。5.烟草角斑病生理小种鉴定方法研究通过对鉴定的19个烟草角斑病菌株接种36个烟草品种,初步将19个菌种划分为I、II、III、IV和V5个生理小种。