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背景:白鲜是一种广泛用于治疗癌症的传统中药。梣桐是从白鲜的根皮中分离的天然产物,已显示其具有神经保护和抗炎活性。然而,梣桐抗肿瘤的分子机制尚不清楚。目的:我们主要研究梣桐对肺癌细胞中PD-L1表达的影响。阐明梣桐抗肿瘤潜在作用机制。方法:1.使用流式细胞术、蛋白免疫印迹和RT-PCR实验测定梣桐对PD-L1蛋白表达的影响。2.使用分子对接、荧光素酶报告基因、免疫荧光、蛋白免疫印迹实验测定梣桐对STAT3蛋白表达的影响。利用蛋白免疫印迹实验测定梣桐对STAT3介导的A549细胞中PD-L1表达的影响。3.执行分子对接、荧光素酶报告基因、免疫荧光、蛋白免疫印迹实验测定梣桐对HIF-1α蛋白表达的影响。采用蛋白免疫印迹实验测定梣桐对HIF-1α介导的A549细胞中PD-L1表达的影响。4.采用蛋白免疫印迹和免疫共沉淀实验测定梣桐对HIF-1α蛋白合成与降解的影响。执行蛋白免疫印迹实验测定梣桐对mTOR/p70S6K/4EBP1和MAPK信号通路的影响。5.通过蛋白免疫印迹、细胞集落、EdU、流式细胞术实验测定梣桐对细胞增殖的影响。6.使用蛋白免疫印迹、小管形成、迁移、侵袭实验测定梣桐对细胞血管生成的影响。7.利用裸鼠移植瘤实验进一步测定梣桐对体内肺癌细胞生长的影响。结果:1.流式细胞术、蛋白免疫印迹和RT-PCR实验结果表明梣桐显著地地抑制不同细胞系中PD-L1蛋白的表达。2.分子对接、荧光素酶报告基因、免疫荧光,蛋白免疫印迹实验结果说明梣桐通过抑制JAK1、JAK2和Src途径抑制STAT3的活化。蛋白免疫印迹实验结果表明梣桐通过抑制A549细胞中STAT3来抑制PD-L1的表达。3.分子对接、荧光素酶报告基因、免疫荧光、蛋白免疫印迹实验结果显示梣桐抑制不同肿瘤细胞系中HIF-1α蛋白的表达。蛋白免疫印迹实验结果表明梣桐通过抑制A549细胞中HIF-1α来抑制PD-L1的表达。4.蛋白免疫印迹和免疫共沉淀实验结果表明梣桐抑制A549细胞中HIF-1α蛋白的合成,而对HIF-1α蛋白的降解没有影响。蛋白免疫印迹实验结果显示梣桐通过抑制A549细胞中mTOR/p70S6K/eIF4E和MAPK信号通路来抑制HIF-1αα蛋白的合成。5.免疫沉淀和蛋白免疫印迹实验结果表明,梣桐通过抑制STAT3和HIF-1α的协同作用来抑制PD-L1的表达。细胞集落形成、EdU和流式细胞术实验结果证明,梣桐通过抑制PD-L1来抑制细胞增殖。6.蛋白免疫印迹、小管形成、迁移和侵袭实验结果说明梣桐通过抑制PD-L1来抑制细胞的血管生成。7.利用裸鼠移植瘤实验结果证实梣桐抑制肿瘤细胞的生长。结论:梣桐通过下调STAT3和HIF-1α信号通路抑制PD-L1的表达,进而抑制癌细胞的增殖和血管生成。这些研究揭示了梣桐以前未知的特征,并为该化合物的癌症作用机制提供了新的视角。