胃癌是全球发病率、死亡率均较高的恶性肿瘤之一，影响预后的主要因素是癌细胞的浸润及转移。淋巴结转移是胃癌的主要转移方式，即使是早期胃癌，其淋巴结转移率也可达8％-15％。因此寻找特异性胃癌转移相关因子，对于阐明胃癌的浸润、转移机制、寻找胃癌诊断标记及治疗靶点均具有重要意义。以往的研究对象主要是培养细胞、动物模型、体液等，不能完全代表人体内胃癌组织的情况，而且主要局限在对单个或部分基因和蛋白的研究，至今仍未找到较特异的标记物用于临床。因此，我们对人胃癌组织原发灶及其同例淋巴结转移灶进行了差异基因及差异蛋白的筛选和研究。 目的：通过比较胃癌原发灶及其淋巴结转移灶的基因表达谱和蛋白表达谱差异，筛选胃癌淋巴结转移相关因子，分析其在胃癌转移中的意义。 方法： 1.利用基因芯片技术进行差异基因组学研究：收集8例胃癌患者的原发灶及其淋巴结转移灶组织，随机分成2组，每组4例。抽提总RNA，逆转录为cDNA，与含有30968个人类基因的寡核苷酸芯片杂交，激光共聚焦扫描仪扫描图像，对图像文件进行数据读取，标准化处理，在二组样本中筛选有2倍以上共同差异表达趋势的基因，分析差异基因的功能。 2.差异蛋白质组学研究：(1)用非染色冰冻切片显微切割的方法分别获取人8例胃癌原发灶与淋巴结转移灶中的腺癌细胞，裂解后提取蛋白，每例取等量蛋白12.5μg，分成2组(同基因组学)；(2)用DIGE染料cy2，Cy3，Cy5对样品分别标记，然后进行二维差异凝胶电泳(2-D DIGE)，获得了人胃癌原发灶与淋巴结转移灶中腺癌细胞的差异蛋白表达图谱，使用Typhoon扫描仪进行图像扫描和DeCyder-Differential Analysis Soflware(Biological Varimion Analysis version5.0)进行分析，识别两者之间的差异表达蛋白质；(3)用MALDI-TOF MS对差异表达的蛋白质进行鉴定，得到相应的肽质量指纹图(peptide mass finger-print，PMF)，搜索数据库鉴定出部分蛋白质； 3.采用RT-PCR方法对部分差异基因进行验证，利用免疫组化SP法检测差异蛋白HSP70、LAP在30例胃癌组织中的表达水平。 结果： 1.比较8例(2组)胃癌患者的原发灶及其淋巴结转移灶的基因表达谱，筛选出283个差异基因，其中165个基因在转移灶中上调，118个基因在转移灶中下调。差异表达基因的功能涉及细胞周期，细胞信号转导，细胞-细胞及细胞-基质间黏附，发育，蛋白水解，物质转运，凋亡等方面。 2.采用非染色冰冻切片显微切割方法，既可以得到较纯的原发灶与淋巴结转移灶中的癌细胞，又不会因为染色改变蛋白所带电荷而引起2-DE图像模式的改变。 3.通过对8例(2组)胃癌原发灶与淋巴结转移灶的腺癌细胞蛋白样本进行二维差异凝胶电泳，建立了分辨率高、重复性好的差异表达图谱。分析显示人Ge11和Ge12蛋白质点分别为1416(similar1062，decreased277，increased77)、1299(similar1050，decreased157，increased92)。 4.运用DeCyder-Differential Analysis Software(Biological Variation Analysisversion5.0)对Ge11、Ge12中的蛋白质点进行T-Test统计及Average Ratio分析(P=0.05，Threshold：>1.5fold或者<-1.5fold)，获得11个差异表达蛋白质，对这11个差异蛋白质点进行肽质量指纹图分析，通过数据库查询鉴定出5个蛋白质点：heat shock70kDa protein8 isoform2 variant(91 PMF，gi|62896815)、chaperonin(180 PMF，gi|31542947)、chaperonin(190PME gi|31542947)、leucineaminopeptidase(300 PMF，gi|12643394)、PREDICTED：hypothetical proteinXP_515584(522 VMF，gi|55597035)，功能分析显示这些差异蛋白质涉及细胞生理活动的多个方面，与肿瘤的发生、发展等密切相关； 5.HSP70在基因组学与蛋白质组学研究中均有改变，RT-PCR结果提示：HSP70mRNA在淋巴结转移灶中的表达低于原发灶，差异有显著性(p<0.05)。免疫组化显示HSP70、LAP表达水平随着胃癌恶性程度的增加逐渐增加，转移灶的表达低于原发灶，与蛋白质组学的分析结果一致。 结论： 1.在胃癌原发灶及其淋巴结转移灶中，筛选到283个差异表达基因，其功能涉及细胞周期，细胞信号转导，细胞-细胞间黏附等方面。 2.采用DIGE技术建立了人胃癌原发灶与淋巴结转移灶中腺癌细胞的差异蛋白表达图谱。 3.鉴定出5个差异蛋：HSP70，chaperonin(2型)、LAP(leucine amino-peptidase)hypothetical protein。 4.HSP70、LAP表达下调可能和胃癌的淋巴结转移有关。