【摘 要】
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癌症成为影响人类健康的主要危害之一,而肝癌又是病死率最高的恶性肿瘤之一,因此肝癌的治疗近年来一直都是研究热点。40%以上的肿瘤细胞自身无法合成精氨酸,而精氨酸脱亚氨基
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癌症成为影响人类健康的主要危害之一,而肝癌又是病死率最高的恶性肿瘤之一,因此肝癌的治疗近年来一直都是研究热点。40%以上的肿瘤细胞自身无法合成精氨酸,而精氨酸脱亚氨基酶(简称为ADI)可以降解外源精氨酸进而杀死肿瘤细胞,因此ADI成为了一种新的潜在抗肿瘤药物。本研究以肝癌细胞和正常肝细胞为研究对象,转染ADI基因到肝癌细胞和正常肝细胞中,通过流式细胞技术证明ADI对肝癌细胞有较强的杀伤作用而对正常肝细胞几乎无毒副作用,保证了利用ADI治疗肝癌的可行性。为了揭开ADI对肝癌细胞作用的分子机制,本研究利用基因芯片从转录组水平检测各个基因表达水平的变化。转染ADI到肝癌细胞和正常肝细胞后提取总RNA,通过芯片杂交、原始数据归一化处理和差异表达基因筛选最终获得感兴趣的五条通路:凋亡、自噬、细胞周期、细胞迁移以及炎症与免疫,随后利用定时定量PCR和蛋白质印迹法验证了基因芯片的结果,另外通过线粒体损伤检测、caspase3与caspase9酶活性变化检测、激光共聚焦显微与流式细胞等技术证明了 ADI在这些代谢通路中的作用。此外,为了找到细胞中与ADI相互作用的蛋白质,本研究利用酵母双杂交技术筛选出了三种与之相互作用的蛋白,挑选其中较为感兴趣的铁蛋白轻链(FTL)进行了免疫共沉淀以及免疫荧光共定位验证实验,证明了 ADI与FTL存在蛋白相互作用。
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