人腺病毒(humanadenovirus，HAdv)是迄今发现的最大最复杂的无包膜的双链DNA病毒之一。自50多年前首先被HillemanandRowe[1，2]分离以来，越来越多的研究揭示人腺病毒是引起急性呼吸道、胃肠道和眼部感染的病原。腺病毒的感染主要以区域性感染或爆发流行形式发生于儿童和招募的新兵中[3]。急性腺病毒感染一般为自限性疾病，但对于免疫功能抑制个体或免疫缺陷患者[4,5]，将会引起严重并发症。尤其是7型、3型、2l型，在儿童及军队中曾引起过严重的致死性肺炎[6，7]。过去几年的研究发现，对于免疫功能抑制个体或免疫缺陷患者来说，腺病毒已日益被确认为具有高发病率及致死率的重要病毒病原体[3]。因缺乏有效治疗药物，腺病毒利用受损伤的免疫反应，这样腺病毒急性或持续感染可致机体多系统损害，甚至危及生命。因此，获取有中和活性的单克隆抗体(MAb)有望成为治疗药物，并在诊断和预防方面有重要意义。　　研究目的：　　本项实验目的在于以人腺病毒3型抗原免疫BALB/c鼠，用细胞融合技术制备具有中和活性鼠源性抗人腺病毒（HAdv）单克隆抗体（MAb）。采用中期分裂相秋水仙素阻抑法对MAb细胞株染色体进行分析，使用鼠MAb亚型鉴定试剂盒进行抗体亚型鉴定，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白质印迹方法（Westernblotting）和间接免疫荧光技术进行特异性鉴定。建立HAdv-3感染动物模型，用获得的HAdv-3MAb进行保护性研究，从而为今后对人腺病毒的防治做实验性的探索。　　实验方法：　　1.杂交瘤细胞的建立：以活的人腺病毒3型（HAdv-3）滴鼻免疫BALB/c鼠，取血清效价大于1:8000的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，以病毒抗原包被，通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测杂瘤细胞的上清进行筛选，阳性孔的杂交瘤细胞给予保留，经过有限稀释法进行三次克隆化，得到能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。　　2.杂交瘤细胞特性分析：采用中期分裂相秋水仙素阻抑法对MAb细胞株染色体进行分析。　　3.单克隆抗体Ig类别、腹水效价及特异性鉴定：使用鼠MAb亚型鉴定试剂盒进行抗体亚型鉴定，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测腹水效价，蛋白质印迹方法（Westernblotting）和间接免疫荧光技术进行特异性鉴定。　　4.建立HAdv-3感染动物模型，研究了获得的HAdv-3MAb的体外中和活性及BALB/c小鼠感染HAdv-3的保护性作用。　　实验结果：　　1.细胞融合率为86％，抗体阳性孔率为51.4％。获得1株能稳定分泌抗HAdv单克隆抗体的杂交瘤细胞（1A4）。　　2.用中期分裂相秋水仙素阻抑法分析1株杂交瘤细胞（1A4），染色体数为98条.　　3.应用鼠MAb亚型鉴定试剂盒鉴定1株杂交瘤细胞（1A4），抗体亚类属IgG2a/κ，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测该抗体腹水效价达10-5，蛋白质印迹方法（Westernblotting）结果发现该抗体特异性地识别HAdv-3感染细胞裂解物中相对分子质量（Mr）约为116kDa六邻体亚单位。间接免疫荧光结果显示，1A4MAb特异性地识别HAdv-3感染的Hep-2细胞。　　4.该MAb的体外中和效价达到1:128。对HAdv-3感染动物有保护性作用。　　结论：　　1.成功制备具有中和活性的鼠源性抗HAdv的单克隆抗体。　　2.通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白质印迹方法（Westernblotting）和间接免疫荧光技术分析,该单克隆抗体具有识别HAdv六邻体蛋白生物学特性。　　3.建立HAdv-3感染BALB/c小鼠模型，证实了获得的HAdv-3MAb对HAdv-3感染BALB/c小鼠有保护作用。