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背景伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma,BL)是一种侵袭性极高的B细胞非霍奇金淋巴瘤,多发生在4-7岁的儿童,男女比例约为2:1。肿瘤细胞常出现特征性的MYC基因转位及EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染。大部分患者经过一线治疗方案治疗后效果良好,但血清乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)明显升高、出现并发症及发现时已是晚期的患者疗效较差。对于难治性BL尚无很好的治疗方案,因此亟需对其高增殖等特点的分子机制进行深入研究,以寻找新的治疗靶点及方案。早在1994年就有研究者在BL中检测到了高表达的T-LAK细胞起源的蛋白激酶(T-LAK cells originated protein kinase,TOPK),这是一种与肿瘤细胞周期、增殖、转移及凋亡密切相关的蛋白激酶。但目前TOPK在BL中的研究仅局限在发现其高表达的现象,至于TOPK在BL中高表达的原因和机制尚无报道。随着近些年基因组学的迅速发展,国外一些学者在BL中检测到了一些热点基因的突变,但这些研究均来自西方国家,我国BL患者的热点基因突变情况尚无相关研究。目的1.了解BL患者的临床特征,包括LDH水平、淋巴细胞/单核细胞比值(Lymphocyte-to-monocyte ratio,LMR)的水平、Ann Arbor临床分期、国际预后指数(International prognostic index,IPI)、治疗方式及预后等情况。2.了解TOPK在BL中的表达情况,明确在BL中两面神激酶2(Janus Kinase 2,JAK2)磷酸化TOPK的作用机制。3.了解中国人BL中的热点基因:ID3、TCF3及MYC基因的突变情况。方法1.收集35例BL病例的一般资料、临床特征、实验室检查数据,并对患者进行随访,了解其预后。对收集整理的结果进行分析、归纳,总结出BL患者的临床特点及其与预后的关系。2.(1)利用免疫组化技术进行TOPK、p-JAK2、p-STAT3、p-ERK1/2等抗体的免疫组化染色,并将组化结果与对应病例的预后做生存分析。(2)由PEPTIDE 2.0(Houston,TX,USA)公司合成并设计包含TOPK不同酪氨酸位点的肽段,利用活化的JAK2激酶进行体外激酶试验,观察可被JAK2磷酸化的TOPK的位点。(3)利用Western Blot实验检测在3株BL细胞系Daudi、P3HR1和Raji中,TOPK及JAK2的表达情况。(4)利用体外结合试验观察在体外及BL细胞系中JAK2和TOPK是否可以相互结合。(5)利用JAK2的激活剂IL-6及其抑制剂AG490观察该途径对TOPK磷酸化的影响。3.用QIAGEN试剂盒提取保留完整的32例BL患者的石蜡组织DNA。利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增ID3基因的外显子1,TCF3基因的外显子17以及MYC基因的全部3个外显子,产物进行电泳纯化并测序。结果1.35例BL病例中,男女比例约为3:1,未成年(<18岁)患者有13例(37.1%)。中位发病年龄为22(1-74)岁,其中有效随访人数为20例,5年生存率为51%。高临床分期、高血清LDH、低LMR(<3.57)、高IPI指数、治疗方式包含手术提示患者预后不良。2.在35例BL患者中TOPK表达均呈弥漫强阳性,27例p-JAK2表达阳性,9例p-STAT3表达阳性,p-ERK1/2在35例病例中表达均为阴性;体外激酶实验观察到JAK2可以磷酸化TOPK第74位的酪氨酸(Tyr74);Western Blot实验检测到在Daudi细胞中TOPK及JAK2的表达均高于P3HR1及Raji细胞;体外结合试验证实无论在体外还是Daudi细胞内JAK2和TOPK均可以相互结合;JAK2的激活剂IL-6及其抑制剂AG490可分别使TOPK Y74位点的磷酸化水平升高或降低。3.我国32例BL患者的ID3、TCF3及MYC突变率与西方文献报道相似,分别为35.5%、18.8%和50.0%。我们还首次发现了TCF3基因及MYC基因的两个重现性的突变位点:TCF3突变,C.2202G>C p.L569V;MYC突变,C.1070A>G p.G182D。新突变位点的发现,为解释BL发生的分子机制提供了新的信息。结论1.我国的BL患者中男性占大多数,人群主要为成年人,确诊患者大多已到疾病晚期,且并发症较多,5年生存率为51%。高临床分期、高血清LDH、低LMR(LMR<3.57)、高IPI指数、治疗方式包含手术提示BL患者预后不良。2.JAK2在BL中可以激活TOPK的Y74位点,提示JAK2可能通过在肿瘤细胞有丝分裂中发挥重要作用的丝/苏氨酸激酶TOPK影响BL细胞的增殖,从而导致肿瘤的发生发展。3.我国BL的热点突变基因ID3、TCF3及MYC基因的突变率与西方国家相似。我们首次发现了TCF3基因的突变位点:C.2202G>C p.L569V及MYC基因的突变位点:C.1070A>G p.G182D。