论文部分内容阅读
同源异型蛋白是一类含有60个氨基酸长度的同源异型结构域的重要转录因子。Arx(Aristaless-relatedhomeobox)是同源异型结构域家族蛋白中的成员，在生长发育中起着关键的作用，与胰腺，底板，前脑，性腺和老鼠胚胎肌肉的发育有关。前期研究发现在C2C12细胞分化过程中内源的Arx有出核的现象。通过异核体实验证明Arx是一个核质穿梭的蛋白质，然而在C2C12分化过程中Arx的表达量变化以及Arx的表达对于C2C12的影响还不清楚。 本篇论文以小鼠成肌细胞系C2C12细胞为模型进行研究。从蛋白质水平和RNA水平上证明了内源Arx的表达量在C2C12细胞分化过程中没有变化。然而，免疫荧光实验证明C2C12细胞分化过程中Arx能够从细胞核进入细胞质中，而且过表达Arx能够抑制C2C12细胞的分化，将内源的ARX敲除之后能够促进C2C12细胞的分化。我们猜测Arx作为转录因子对下游靶基因调控进而影响细胞分化。通过数据库筛选我们找到SIX1基因，有研究表明SIX1基因缺失的小鼠其肌细胞分化停滞，Six1在C2C12细胞分化过程中表达水平上调。我们在C2C12细胞中过表达Six1之后，发现细胞的分化水平升高;敲除了SIX1之后，细胞的分化受到抑制。另外，我们发现SIX1基因的启动子区含有Arx的结合位点TAATTA，通过荧光素酶活性测定和EMSA实验，我们证实了Arx能够特异结合SIX1的启动子区。通过Westernblot和半定量RT-PCR实验证明，在C2C12细胞中过表达Arx之后，能够观察到Six1蛋白的表达水平降低，而在C2C12细胞中敲除了ARX之后，Six1的表达水平升高。本篇论文提出了在C2C12细胞分化过程中，虽然Arx的表达量没有变化，但是Arx能够通过转录抑制SIX1在肌细胞发生中发挥作用。