聚乳酸降解菌的选育及其解聚酶的研究

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人类发展到21世纪,生活质量逐渐提高,石油化工产品越来越多的应用于人类的日常生活中,塑料作为一种广泛的金属的代替品而深受人们的喜爱,其应用广泛,经济耐用,成本低,使用方便等特点使其生产规模逐年扩大,然而低成本的塑料制品又很少有回收的价值,因此而导致了令人头疼的白色污染问题,为了解决白色污染,各国都在极力的寻找一种可以代替传统塑料的材料,聚乳酸(PLA)作为一种可降解塑料的原材料,由于其特有的性能而受到越来越多的关注,聚乳酸是利用乳酸为原料合成的聚酯材料,具有良好的生物降解性,现已应用到医疗卫生,纺织,包装,农业等领域。本论文重点在于证明聚乳酸生物降解可行性。筛选出一株具有降解聚乳酸能力并可分泌聚乳酸解聚酶的细菌,探究该菌株分泌聚乳酸水解酶的最佳条件,分离、纯化出聚乳酸解聚酶,并对其酶学性质进行初步研究。实验结果如下:1从抚顺石油厂的活性污泥中筛选纯化出菌株DS0701,经过生理生化性能比对,以及16SrDNA鉴定,该菌系属于纤维单胞菌属(Cellulomonas.sp.),且该菌具有降解PLA能力。2对菌株DS0701降解PLA的条件进行检测,最终确定,最适培养温度为37℃,最适培养pH为7.0。培养时间为72h,最佳摇床转数为150r/ min。3对DS0701菌株降解能力测定,检测结果表明,菌株DS0701不仅能够降解PLA,而且对其他的几种可降解材料也有降解能力,如聚羟基丁酸酯(PHB)、3-羟基丁酸与3-羟基戊酸的共聚物(PHBV),聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)(P(3-4HB))等。4进行酶的分离与纯化,在对培养条件进行测定之后,对该菌株进行发酵产酶,通过离心,超滤,冻干,盐析,层析等方式对PLA解聚酶进行分离与纯化,进而研究其解聚酶的酶学性质。5.进行聚乳酸薄膜降解,降解时间为9天,降解后膜透明度明显减弱,变为白色,强度大大降低,膜的边角明显变圆,质地变酥脆。从扫描电镜照片上可以观察到膜表面部分地方开始变化,聚乳酸膜逐步裂解,膜表面因被降解而开始变得粗糙至膜出现细微裂痕和空洞。
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