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目的:建立、优化自动化在线(On-line)固相萃取(Solid Phase Extraction)-高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography)-二级管阵列检测器(Diode Array Detector)系统,并应用于生物样品中抗癌高活性化合物WM-5、TEB307的定量分析,研究WM-5、TEB307在小鼠体内的药代动力学特征。
方法:应用响应面法(Response Surface Methodology)优化在线固相萃取参数,建立在线SPE-HPLC-DAD方法。采取口服(po)和静脉注射(iv)方式给药,通过Ultimate3000系统测定小鼠血浆中WM-5、TEB307的血药浓度,采用非房室模型统计矩方法与WinNonlin5.2软件计算WM-5与TEB307在小鼠体内的药代动力学参数。
结论:⑴Box-Behnken设计四因素、三水平共29次实验对影响固相萃取相关因素进行分析,根据峰面积与响应值判断,各因素中对分析结果的影响程度由大到小依次为:洗脱剂pH值(pH)>柱切换时间(t(T))>基质洗脱时间(t(M))>洗脱剂流速(F);⑵该方法可用于分析WM-5、TEB307在小鼠体内的血药浓度,同时具备高通量、高灵敏度与高特异性等优点,方法精密度、准确度、定量限各条件可满足药代动力学的方法学要求;⑶TEB307经小鼠口服后,平均Tmax=0.79 h;平均AUC0-t=37042.20 ng·mL-1·h,半衰期t1/2=3.02 h,体内平均滞留时间MRT=4.24 h,绝对生物利用度适中,F平均值为41.48%;⑷WM-5经小鼠口服后,平均Tmax=0.17 h;平均AUC0-t=7988.47 ng·mL-1·h,半衰期t1/2=3.45h,体内平均滞留时间MRT=2.13 h,绝对生物利用度较低,F平均值为18.74%。