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目的:构建Sox9 siRNA表达载体,探讨其对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖、凋亡的影响。
方法:根据Kou I,Ikegawa S提供的Sox9 mRNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilencer质粒中,并对重组质粒(命名为pSilencer/Sox9 siRNA,p/s)进行PCR、酶切及测序鉴定。利用脂质体将重组质粒转染软骨肉瘤SW1353细胞,以MTT、流式细胞仪检测重组质粒、阴性对照质粒转染SW1353细胞和未转染SW1353细胞细胞增殖及凋亡的变化。
结果:PCR、双酶切证实Sox9 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。重组质粒pSilencer/Sox9组细胞光吸收值,早期凋亡细胞阳性率,分别与阴性对照质粒组、未转染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:成功构建Sox9 siRNA表达载体,证实pSilencer/Sox9 siRNA对软骨肉瘤SW1353细胞的增殖有明显的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用。Sox9可为治疗软骨肉瘤开辟新途径。