肌醇六磷酸通过PI3K/Akt信号通路对结肠癌HT-29细胞生长的影响

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目的:通过研究PI3K/Akt信号通路在肌醇六磷酸(inositol hexaphosphate,IP6)抑制结肠癌HT-29细胞生长中的作用,探讨IP6诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:1.体外培养结肠癌HT-29细胞,使用不同浓度的IP6(0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L)进行干预,并依此浓度分组,干预24 h和48h。2.MTT法检测不同浓度的IP6(0μg/m L,50μg/m L,100μg/m L、200μg/m L、400μg/m L)对结肠癌细胞分别干预24h和48h生长抑制作用效果。3.应用流式细胞仪技术,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度IP6组对结肠癌细胞干预48h后的细胞凋亡率。4.Western-blot检测PI3K、p Akt、Akt和caspase-9蛋白的表达情况。5.Real-time PCR检测PI3K、Akt、caspase-9、m TOR和NF-κB m RNA的表达情况。结果:1.随IP6干预浓度的增加和时间的延长,IP6对HT-29细胞生长的抑制作用逐渐增强且有显著的时间-剂量依赖性。2.HT-29细胞经IP6作用48h后,随着IP6浓度的增加,HT-29细胞的凋亡增加,且IP6主要诱导HT-29细胞发生早期凋亡。3.在IP6干预48h后,随着IP6干预浓度的增加,PI3K,Akt及p Akt的表达逐渐降低,并呈浓度依赖性(P<0.05),随着IP6浓度的增加,caspase-9表达逐渐增加,呈浓度依赖性(P<0.05)。4.在IP6干预48h后,随着IP6干预浓度的增加,PI3K、Akt和m TOR的m RNA的表达逐渐降低,而NF-κB及caspase-9的m RNA表达逐渐增加(P<0.05)。结论:1.IP6能够抑制HT-29结肠癌细胞的增殖,并呈浓度依赖性。2.IP6能够诱导HT-29结肠癌细胞凋亡。3.IP6对HT-29结肠癌细胞PI3K/Akt信号通路的作用中有:下调了PI3K及Akt的表达,抑制了Akt的磷酸化过程,上调了caspase-9的表达,下调了通路下游m TOR和NF-κB的表达,从而发挥了诱导细胞凋亡的作用。
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