犬流感（Canine influenza,CI）是由正粘病毒科A型流感病毒属的犬流感病毒（Canine influenza virus,CIV）引起的一种犬属动物接触性呼吸道传染病。患病犬主要临床症状表现为发热、流涕、咳嗽、喷嚏、精神沉郁、食欲减退等。犬在全球饲养数量已达到40亿,我国约有宠物犬1.5亿只,作为人类最重要的伴侣动物之一,极有可能成为流感病毒传播给人类的中间宿主。目前国内外已经发现了H1、H3、H5和H9等亚型流感病毒能够感染犬,H3N2亚型CIV是目前主要的流行毒株。自从2006年第一次在中国发现H3N2 CIV以来,该病毒都只在亚洲流行,然而,2015年该病毒传播到了美国。但是关于CIV的疫苗目前只有美国批准上市的H3N8和H3N2亚型CIV疫苗,韩国也只是研制了未上市的H3N2亚型CIV疫苗。中国到目前还没有关于H3N2亚型CIV有效的疫苗研究,因此,研制H3N2亚型CI疫苗对犬流感病毒的防控具有重大意义。本研究采用2014年冬天在临床分离的4株CIV毒株A/canine/Guangdong/01/2014（H3N2）（GD1401）,A/canine/Guangdong/02/2014（H3N2）（GD1402）,A/canine/Guangdong/03/2014（H3N2）（GD1403）和A/canine/Guangdong/04/2014（H3N2）（GD1404）,分别接种SPF鸡胚进行传代培养,结果显示在传到第8代时,只有GD1404株的血凝效价稳定在2⁷²⁸。HA、NA基因序列分析与原毒同源性分别为100%,可确定为疫苗候选毒株。并将其作为种毒F1在SPF鸡胚中进行传代,建立了病毒种子批。将种毒库中F5代种毒用于疫苗研究的攻毒模型的建立,感染10周龄健康比格犬,建立了有效的临床症状评分标准,确定了攻毒途径为滴鼻攻毒,最小攻毒剂量为10³鸡胚半数感染量(EID₅₀)。通过三种不同灭活剂:甲醛、二乙烯亚胺（BEI）和β-丙内酯（BPL）,在4℃⁸℃,100 rpm摇床上,对疫苗毒株在不同浓度和不同时间进行灭活,从灭活程度以及灭活前后的血凝效价得出最优化的灭活工艺条件是:用BPL灭活剂在终浓度为0.025%灭活48 h。将GD1404毒株灭活后与GEL01佐剂按92:8混合制备灭活疫苗,对十周龄比格犬进行动物安全性试验以及攻毒保护试验。试验表明,该灭活疫苗对犬安全且有效。在一免后第7天测得HI抗体为1:40,在二免后攻毒第14天HI抗体达到最高,为1:5120。并且攻毒后并未出现犬流感临床症状,体温也维持在正常水平,并且免疫组只有一只犬鼻拭子病毒滴度在第2天排毒。本研究选育出GD1404株为疫苗毒株,通过灭活工艺的优化并且建立了科学的CI临床症状评分标准,制备了安全有效的GEL01佐剂灭活疫苗,为CIV的防治具有重要的公共卫生学意义。