兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆与组织时空表达研究

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本研究以0至150日龄兴义鸭为研究素材,利用RT-PCR结合A/T克隆的方法对肌细胞增强因子2家族(MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D)所有成员完整编码区(CDS)序列进行克隆,并对四个成员序列进行相关生物信息学分析,同时运用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术对兴义鸭该基因家族四个基因在不同生长阶段的心、肝、肺、肾、十二指肠、大脑、胸肌、腿肌、肌胃、腺胃10个组织的m RNA表达水平进行检测,试验主要研究成果如下:(1)成功克隆获得了兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因编码区序列,全长分别为1479 bp、1221 bp、1104 bp(1308 bp)和1548 bp的开放阅读框序列,分别编码492、406、367(435)和515个氨基酸,同时发现兴义鸭MEF2C基因可能存在两种剪切方式。(2)本研究首次克隆获得鸭MEF2B基因CDS区序列,该片段包含起始密码ATG和终止密码TAG,经序列比对与其他物种同源性较高。经NCBI在线预测m RNA保守结构域,结果显示其含有MADS-box保守结构域,不含HJURP_C区域,符合脊椎动物MEF2B结构特征。(3)兴义鸭MEF2基因家族实时荧光定量PCR检测发现,该基因家族所有成员的m RNA在0、30、60、90、120和150日龄鸭的10个组织中均有不同程度的表达,经统计分析,各基因的相对表达量在不同组织、不同阶段以及不同性别之间均存在显著差异。各基因在性别之间的表达差异都达到了显著水平,但同一生长阶段不同组织中公鸭和母鸭的表达趋势并不一致,同一组织不同生长阶段公鸭和母鸭的表达趋势并也不一致,这可能跟公母鸭的生长发育规律不同有关。各基因在同一生长阶段不同组织之间的表达差异都显著,同一组织不同生长阶段之间的表达差异也都达到显著水平,但各基因的表达趋势并不一致,表明四个基因的表达并不同步,这可能与四个基因各自的功能和表达顺序不同有关。
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