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目的: 1.分析邢台地区产超广谱β内酰胺酶(Extended Spectrumβ-Lactamases，E-SBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性和流行情况，指导临床进行合理用药。 2.采用PCR技术对产ESBLs的肺炎克雷伯菌进行基因扩增确定其基因型别，掌握邢台地区产ESBLs的肺炎克雷伯菌分子流行病学特点。 方法: 1.菌株来源 收集邢台地区邢台市人民医院2013年1月至2013年12月从不同患者血液、尿液、痰液、分泌物、引流液和体腔液等分离出的不重复的肺炎克雷伯菌菌株。用BD PhoenixTM100全自动微生物鉴定/药敏分析仪进行菌株鉴定。 2.药敏试验 用BD PhoenixTM100全自动微生物鉴定/药敏分析仪进行肺炎克雷伯菌药敏试验。补充药敏试验采用K-B纸片法。按照CLSI M100-S20文件(2010版)标准判定药敏结果。 3.ESBLs的表型确证试验 采用CLSI M100-S20文件（2010版）推荐的ESBLs的表型确证试，收集到93株产ESBLs的肺炎克雷伯菌。 4.耐药基因的检测 选取16种与产ESBLs的肺炎克雷伯菌的相关耐药基因，采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)方法对进行扩增，产物在琼脂糖凝胶中进行电泳，最后置于紫外凝胶成像系统中观察照相，出现与目的基因分子大小相当的条带即可判定为阳性。 5.DNA测序分析 对于耐药基因阳性率比较高的组(CTX-M-1，CTX-M-9，TEM，SHV和IMP)随机选取4株进行DNA测序，并将测得的DNA序列与GenBank数据库进行比对，确定其基因亚型以及有无核苷酸序列的改变。 结果: 1.ESBLs的检出率 邢台市人民医院2013年1月至2013年12月，分离出肺炎克雷伯菌177株，其中产ESBLs的肺炎克雷伯菌93株，检出率为52.5％。 2.标本来源的类型构成 在筛选出的93株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中，其中分离自痰、脓液、分泌物、尿液、全血和脑脊液的菌株数分别为69、11、6、3、3、1，它们所占的比例分别为74.2％、11.8％、6.5％、3.2％、3.2％、1.1％。 3.产ESBLs的肺炎克雷伯菌的临床分布 在临床分离的93株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中，来自新生儿科的29株(31.2％)，神经外科的14株(15.1％)，ICU的6株(6.5％)和普外科6株(6.5％)。以上科室分离菌株55株，占总株数的59.1％。 4.产ESBLs的肺炎克雷伯菌药敏试验结果 在25种临床常用的抗菌药物中，(1)头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松、氨苄西林和哌拉西林的耐药率均为100％，头孢他啶、头孢吡肟和氨曲南的耐药率分别为78.3％、90.6％、93.5％。(2)美罗培南和亚胺培南已经出现耐药菌株，耐药率分别为4.3％和7.5％。(3)含有β-内酰胺酶抑制剂的复合抗菌药物中，哌拉西林/他唑巴坦的耐药率最低，为37.0％，替卡西林/克拉维酸的耐药率最高，为74.3％。(4)非β-内酰胺类抗菌药物中，阿米卡星的耐药率最低为14.5％。 5.耐药基因检测结果 (1)93株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中，耐药基因TEM，SHV, CTX-M-1，CTX-M-9，IMP, CTX-M-25，OXA-1，OXA-10，PER，GES的检出率分别为77.4％,86.0％,46.2％,61.3％,19.4％,2.2％,16.1％,2.2％,1.1％,1.1％;CTX-M-2，CTX-M-8，OXA-2，VEB，VIM和KPC等6种耐药基因没有检出。(2)所有菌株均携带2种或2种以上的耐药基因。其中22株(23.6％)携带2种耐药基因，41株(44.1％)携带3种耐药基因，26株(28.0％)携带4种耐药基因，4株(4.3％)携带5种耐药基因。 6.基因测序结果 随机选取的CTX-M-1，CTX-M-9，TEM，SHV, IMP五组耐药基因的核苷酸序列，经与GeneBank的ESBLs的基因序列对比发现，同源性为100％，没有发生基因突变。 结论: 1.邢台地区产ESBLs的肺炎克雷伯菌检出率为52.5％，存在多重耐药现象。菌株来源以痰标本为主，从新生儿科分离的菌株最多。 2.检出的产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因主要为CTX-M，SHV和TEM型，所有菌株均携带2种或2种以上的耐药基因。 3.邢台地区分离的碳青霉烯类抗菌药物不敏感的菌株，其主要耐药机制是产金属β-内酰胺酶。 4.CTX-M-1，CTX-M-9，TEM，SHV和IMP五种耐药基因与GeneBank的产ESBLs参考株核苷酸序列同源性为100％，没有发生基因突变。 5.医院应该加强产ESBLs菌株的耐药性以及耐药基因的监测，指导临床更加科学、有效的使用抗菌药物，降低ESBLs的感染率以及耐药基因的突变，提高治疗感染的效率，防止医院感染的发生。