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第Ⅰ部分环磷酸腺苷抑制CTGF表达调控小鼠心肌梗死后心肌纤维化的作用观察摘要：目的观察环磷酸腺苷(cAMP)对小鼠心肌梗死后结缔组织生长因子(CTGF)的调控作用以及对心肌纤维化的影响方法72只SPF级C57BL雄性小鼠随机分为假手术组(MS组)、心肌梗死组(MI组)及药物干预组(MT组),每组各24只。MI组及MT组小鼠呼吸机辅助开胸结扎左冠状动脉前降支(LAD)建立心肌梗死动物疾病模型：MS组小鼠开胸后不结扎,其余操作同MI组及MT组。术后1周开始MT组腹腔注射环磷酸腺苷葡胺(MAC),连续给药4周；同时MS组及MI组注射等量生理盐水对照。术后第5周,各组随机抽取10只小鼠行心脏超声检测,测量心脏形态指标及心功能指标；超声完毕后,立即开胸收获心脏标本,行组织形态学HE染色、胶原纤维Masson染色及CTGF免疫组化染色。各组剩余小鼠按照5只、5只、4只随机分成3组,收获心脏标本,分离左心室梗死区及非梗死区,分别行羟脯氨酸含量测定、CTGF蛋白表达western blot检测及CTGF mRNA、TGF-β1mRNA表达量RT-PCR检测.结果超声心动图提示MT组射血分数(EF)为(19.83±3.95)%,左室短轴缩短率(FS)为(9.07±1.9)%,均高于MI组[EF(13.65±2.14)%,FS(6.22±1.03)%](P<0.05)；左心室每搏输出量(SV)MT组[(26.26±3.57)μL]优于MI组[(18.82±2.71)μL](P<0.05)；MT组左心室前、后壁厚度及内径与MI组之间无明显差异(P>0.05)。心脏Masson染色提示MT组胶原纤维向非梗死区心肌组织浸润减少；免疫组化CTGF阳性表达较MI组减少。MT组梗死区羟脯氨酸含量[(1388.98±86.26)u g/mg]低于MI组[(1673.12±199.97) μ g/mg](P<0.05)；非梗死区羟脯氨酸含量[(662.92±98.05)μ g/mg]低于MI组[(855.84±83.3)u g/mg)](P<0.05)。Western blot检测提示MT组CTGF蛋白表达量低于MI组(P<0.05)。RT-PCR检测提示MT组CTGF mRNA表达量低于MI组(P<0.05);TGF-β1mRNA表达量MT组与MI组之间在梗死区与非梗死区均无明显统计学差异(P>0.05)。结论环磷酸腺苷可以抑制CTGF的表达,降低小鼠心肌梗死后胶原纤维的表达,减轻梗死区胶原纤维向非梗死区心肌的浸润程度,改善心脏功能。第Ⅱ部分激活cAMP信号通路调控小鼠心肌成纤维细胞结缔组织生长因子的表达摘要：目的研究小鼠心肌成纤维细胞(MCFs)胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度提高对结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响及其信号通路。方法采用1周龄内C57BL乳鼠,获取心脏后分离培养原代MCFs,第3代细胞用于实验。使用转化生长因子-β1(TGF-β1)培养细胞,快速上调MCFs对CTGF的表达,模拟小鼠心肌梗死后CTGF高表达情况。使用腺苷酸环化酶激活剂Forskolin干预培养细胞后检测MCFs表达CTGF的变化,同时检测可能的信号分子蛋白激酶A(PKA)、p44/42丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)及磷酸化p44/42MAPK表达的变化。分别给予PD98509及Rp-cAMPS抑制p44/42MAPK的磷酸化水平及PKA的表达,检测细胞PKA、p44/42MAPK、磷酸化p44/42MAPK表达的变化,并同时检测细胞内CTGF的表达。结果TGF-β1可以快速上调MCFs对CTGF的表达。Forskolin干预培养MCFs后,细胞内cAMP浓度明显提高、细胞活力下降；同时细胞中CTGF mRNA及蛋白表达均下降；其可能的信号分子PKA表达上升,磷酸化p44/42MAPK水平表达下降而p44/42MAPK总蛋白无明显改变。MCFs给予PD98509抑制p44/42MAPK磷酸化水平后,PKA表达上升,同时细胞中CTGF mRNA及蛋白的表达下调：给予Rp-cAMP抑制PKA活化后,p44/42MAPK磷酸化水平升高,细胞中CTGF mRNA及蛋白表达出现上调。结论Forskolin可以通过提高MCFs胞内cAMP浓度抑制MCFs对CTGF的表达。其作用信号通路为高浓度cAMP上调PKA表达,降低下游p44/42MAPK磷酸化水平,抑制CTGF的表达。