反义寡核苷酸抑制肝癌细胞β-catenin表达及细胞生长的研究

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目的 探讨不同序列的反义寡核苷酸对肝癌细胞β-catenin表达及细胞生长的抑制效果。 方法 SMMC7721细胞常规条件下培养,细胞接种于6孔板后,各加入不同的反义寡核苷酸(反翻译起始部位AS-AUG、、反翻译终止部位AS-UGA、错义组和空白组),然后收集细胞提取总RNA以RT-PCR方法分析β-catenin和其靶基因c-myc mRNA的表达,同时以β-actin表达为内对照;另以westernblot 方法检测β-catenin蛋白质的表达。并且收集被反义寡核苷酸处理后的细胞做集落形成实验,计算集落形成率。 结果 反义寡核苷酸具有明显特异性抑制β-catenin mRNA及蛋白的表达, AS-AUG、AS-UGA和错义组mRNA抑制率分别为0.75±0.08、0.42±0.10、0.15±0.06和0.11±0.05,蛋白质的抑制率分别为61±5%、48±3%、 12±9%和15±7%。翻译起始部位的反义寡核苷酸表现最强的抑制作用(P<0.01),同时,c-myc 相应地得到抑制。集落形成实验显示细胞生长也得到了明显抑制。 结论 针对β-catenin翻译起始部位结构的反义寡核苷酸,有望成为HCC反义基因治疗的新选择。
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