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目的:稽留流产(MA)是一种常见的不良妊娠,严重影响了育龄妇女的身心健康。尽管维持氧化应激平衡在胎盘生长发育中的重要性已经知晓,但氧化应激失衡在稽留流产中的作用机理仍知之甚少。APPL1蛋白是通过蛋白质组学技术在稽留流产绒毛组织中鉴定到的差异蛋白之一。到目前为止,对APPL1蛋白在稽留流产中与氧化应激关联性认识尚属空白。因此,本研究旨在评估APPL1对氧化应激平衡的潜在影响以及涉及的分子机制。方法:1、收集2018年1月至2019年5月收治的15例稽留流产患者的绒毛组织设为MA组,收集同期收治的15例正常妊娠流产患者的绒毛组织设为Control组。用不同浓度的抗氧化剂或者氧化剂处理Control组绒毛组织以改变细胞内活性氧(ROS)水平。利用DHE染色检测各组绒毛滋养细胞内ROS水平。检测各组样品中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。利用TUNEL染色检测各组细胞凋亡情况。利用免疫组化观察各组绒毛组织中APPL1的表达模式。利用Western Blot和qRT-PCR检测各组绒毛组织中APPL1、Nrf2、HO-1蛋白和mRNA的相对表达水平。2、通过人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系构建多组细胞模型,进一步验证APPL1与Nrf2/HO-1通路的联系。在HTR-8/Svneo细胞中转染siAPPL1以抑制APPL1的表达,并且进行一系列挽救实验,用抗氧化剂或氧化剂预处理HTR-8/Svneo细胞后再转染siAPPL1。利用ROS检测试剂盒和DCF染色观察各组细胞中ROS的产生,利用SOD活性试剂盒检测各组细胞抗氧化能力,利用TUNEL染色、CCK8试剂盒和流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,利用Western Blot和qRT-PCR检测APPL1、Nrf2/HO-1信号通路相关基因的表达水平。结果:1、MA组和经氧化剂处理的Control组绒毛滋养细胞内ROS积累,细胞凋亡增多,SOD活性下降,APPL1、Nrf2和HO-1表达水平下调。而抗氧化剂的处理抑制了绒毛滋养细胞内ROS产生和细胞凋亡,诱导SOD激活,促进APPL1、Nrf2和HO-1表达。2、免疫组化结果显示,MA组和经氧化剂处理的Control组样品中合体滋养细胞内APPL1免疫染色阳性信号消失,细胞滋养细胞和绒毛间质细胞无明显变化。3、在HTR-8/SVneo细胞内沉默APPL1基因后,细胞内ROS积累,细胞凋亡增多,抗氧化相关因子SOD和Nrf2/HO-1信号通路下调。4、用抗氧化剂预处理HTR-8/SVneo细胞以降低细胞内ROS的基础水平后,siAPPL1对细胞产生的不利影响可以被抗氧化剂以浓度依赖性的方式挽救。然而,用氧化剂预处理细胞会加重siAPPL1产生的ROS积累、细胞凋亡和抗氧化途径表达下调。结论:1、胎盘部位爆发的氧化应激损伤严重影响了滋养细胞的增殖和分化,最终导致稽留流产的发生。2、APPL1蛋白具有抗氧化特性,可作为上游信号分子正向调控Nrf2/HO-1通路的功能,在滋养细胞的氧化应激平衡和细胞存活中起重要作用。3、抗氧化剂的应用可有效恢复由过量ROS引起的氧化应激损伤,因此抗氧化的药物可以参与稽留流产的临床治疗。