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背景:肺癌是常见恶性肿瘤之一。在很多国家,肺癌发病率居恶性肿瘤之首,而非小细胞肺癌病人中五年生存率只有10%左右。尽管传统的治疗手段取得长足进展,但肺癌病人的总体生存率并未得到明显提高。因此探寻新的治疗手段具有重要意义。目前越来越多研究表明基因治疗肿瘤是一种行之有效的方法。Klotho基因是一种新型的抗衰老基因,能有效增加机体免疫功能,但现在越来越多的研究表明Klotho基因与癌症有着密切关系。CD40配体(CD40L)为TNF超家族中的一员,首先发现表达在激活的CD4~+的T淋巴细胞表面,在机体细胞免疫及体液免疫中均有重要作用,目前已证实多种恶性肿瘤细胞上有CD40表达,CD40信号激发后可产生直接和间接的抗肿瘤作用。既然sCD40L和Klotho基因对肿瘤及免疫均有作用,我们推测两者联合后可以进一步抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡。目的:本实验旨在探讨Klotho基因联合可溶性CD40配体对肺癌细胞A549(CD40表达阳性细胞株)的生物学作用及其相关机制。方法:定量RT-PCR法观察Klotho过表达质粒pCMV6-MYC-KL转染A549细胞后Klotho mRNA表达水平;MTT法观察细胞生长活性的变化并绘制生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,定量RT-PCR检测凋亡相关基因Bax/Bcl-2的表达变化。结果:(1)Klotho基因联合sCD40L较单独转染Klotho基因或加入sCD40L对细胞A549的生长抑制作用增加(p﹤0.05)。(2)流式细胞术检测表明Klotho基因联合sCD40L作用于细胞A549后,细胞凋亡率较单独转染Klotho或单独加入sCD40L升高(p﹤0.05)。(3)Klotho基因联合sCD40L作用于A549细胞48小时后,Bcl-2基因表达量的下降较单独转染Klotho基因或单独加入sCD40L增加(p﹤0.05),单独转染Klotho基因可使Bax基因表达量上调(p﹤0.05),但单独加入sCD40L组,Bax基因表达量较空白对照组无明显差异(p≧0.05)。结论:Klotho基因和sCD40L分别单独应用及两者联合均可通过抑制细胞周期,上调Bax基因表达和/或下调Bcl-2基因表达来抑制肺癌A549细胞增殖、促进其凋亡;而两者联合应用后,对A549细胞的上述作用进一步增强。